e花环实验原理

e花环实验原理如下：

免疫学上用来检测T细胞数量的一种实验方法，T细胞表面具有能与绵羊红细胞（SRBC）表面糖肽结合的受体，称为E受体（CD2）。CD2是一种糖蛋白，相对分子质量为30000～60 000，已证实E受体是人类T细胞所特有的表面标志。

当T细胞与SRBC混合后，SRBC便粘附于T细胞表面，呈现花环状。通过花环形成检查T细胞的方法，称为E花环形成试验。根据花环形成的多少，可测知T细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断疾病的预后，考核药物疗效等。

操作方法：

1、用分层液密度梯度离心法分离淋巴细胞，计数后，用Hanks液配成107个/ml细胞悬液。

2、取0.1ml淋巴细胞悬液，加入0.1ml1%SRBC及0.05ml灭活小牛血清，混匀。

3、37℃静置5分钟，500rpm低速离心5min后，放入冰箱，2小时或过夜。

4、取出试管，吸弃上清液，加0.8%戊二醛溶液1滴，轻轻旋转混匀，置4℃冰箱固定15分钟。

5、取出后，轻轻旋转试管，使沉淀细胞重新悬浮；取1滴涂片，自然干燥后，瑞氏染色，高倍下观察。

注意事项：

1、SRBC最好是新鲜的，一般采血后保存在Alsever保存液中，2周内可以用，超过2周SRBC与淋巴细胞的结合能力下降。

2、从采血到测定，不得超过4小时，若用分离的淋巴细胞，放置时间也不得超过4小时，否则SRBC受体会自行脱落。同时用锥虫蓝检查活力，活细胞不少于95%。

3、计数前应将沉于管底的细胞予以重悬，但只宜轻缓旋转试管，使细胞团块松开即可，不能过猛或强力吹打，否则花环会消失或减少。

4、要求全部试验在室温（16～23℃）中进行。