RFect 小核酸转染试剂步骤

操作步骤 ：本说明书适用于 24 孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。

A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在 30-50%。

B. siRNA-RFect 混合物准备：

1. 6pmol siRNA 用 50μl 无血清培养基稀释。

2. 2μl RFect 用 50μl 无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育 5min。 注意：确保在 25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。

3. 孵育 5min 后，将 siRNA 稀释液与 RFect 稀释液混合（总体积 100μl）。轻轻混匀，室温孵育 20 min。

C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：

1. 将 100μl 混合物加入培养孔内，培养孔内含有 0.5ml 培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。

2. 37°C 培养 18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养 4-6h 时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、

所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。

转染实验要点：

 转染过程不可添加抗生素，否则会导致细胞死亡；

 首次实验 siRNA 的用量设置在终浓度 10nM、30nM、50nM、100 nM 进行摸索 ，后续实验根据实验结果修改。

转染实验优化: 为了提高转染效率， 最好 对转染条件进行优化 ，特别是首次使用 。 例 如 ：24 孔培养板 ，整 调整 siRNA 与 与 RFect 试剂的用量 。