为了进行细胞培养,首先要从生物体取得细胞,目前获取细胞的方法有两种,分离法？
生物选修三 测试题
一、 选择题（将正确答案填涂在机读卡上，每题只有一个正确答案，1.5分×40共60分 ）
1．从基因文库中获取目的基因的根据是
A．基因的核苷酸序列 B．基因的功能
C．基因的转录产物m RNA D．以上都是
2．在基因表达载体的构建中，下列说法不正确的是
①一个表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子
②有了启动子才能驱动基因转录出mRNA
③终止子的作用是使转录在所需要的地方停止
④所有基因表达载体的构建是完全相同的
A．②③ B．①④ C．①② D．③④
3．人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是
A．大肠杆菌 B．酵母菌 C．T4噬菌体 D．肺炎球菌
4．干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血液中提取，每升人血中只能提取0.5μg，所以价格昂贵。美国加利福尼亚的某生物制品公司用如下方法生产干扰素。如图所示：
从上述方式中可以看出该公司生产干扰素运用的方法是
A．个体间的杂交 B．基因工程 C．细胞融合 D．器官移植
5．科学家将β-干扰素基因进行定点突变导入大肠杆菌表达，使干扰素第17位的半胱氨酸改变成丝氨酸，结果大大提高β-干扰素的抗病性活性，并且提高了储存稳定性。该生物技术为
A．基因工程 B．蛋白质工程 C．基因突变 D．细胞工程
6．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③合成培养基需加血清、血浆
④温度与动物体温相近 ⑤需要O2，不需要CO2 ⑥CO2能调节培养液pH
A．①②③④⑤⑥ B．①②③④ C．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥
7．蛋白质工程的基本流程正确的是
①蛋白质分子结构设计 ②DNA合成 ③预期蛋白质功能 ④据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列
A．①→②→③→④ B．④→②→①→③
C．③→①→④→② D．③→④→①→②
8．要合成自然界中不存在的蛋白质首先应设计
A．基因结构 B．mRNA结构 C．氨基酸序列 D．蛋白质结构
9．蛋白质工程是一项难度很大的工程，目前已成功的是
A．对胰岛素进行改造，生产速效型药品 B．蛋白质工程应用于微电子方面
C．体外耐保存的干扰素 D．用蛋白质工程生产高产赖氨酸玉米
10．动物细胞工程技术的基础是
A．动物细胞融合 B．胚胎移植 C．动物细胞培养 D．核移植
11．关于细胞全能性的理解不确切的是
A．大量的科学事实证明，高度分化的植物体细胞仍具有全能性
B．细胞内含有个体发育所需的全部基因是细胞具有全能性的内在条件
C．通过植物组织培养得到的试管苗，是植物细胞在一定条件下表现全能性的结果
D．通过动物细胞培养获得细胞株或细胞系，证明了动物体细胞也具有全能性
12．下列哪项不是基因工程中经常使用的运载目的基因的载体
A．细菌质粒 B．噬菌体 C．细菌拟核中的DNA D．动植物病毒
13．限制性核酸内切酶切割DNA时
A．专一识别特定的核苷酸序列，并在特定的位点进行切割
B．有多个酶切位点
C．任意切割，没有特定的核苷酸序列
D．识别特定的核苷酸序列，但切口多个
14．与“限制性核酸内切酶”作用部位完全相同的酶是
A．反转录酶 B．RNA聚合酶 C．DNA连接酶 D．解旋酶
15．人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗生素抗性基因，该抗性基因的主要作用是
A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性
B．有利于对目的基因是否导入进行检测
C．增加质粒分子在受体细胞存活的机会
D．便于与外源基因连接
16．基因工程的正确操作步骤是
①构建基因表达载体 ②将目的基因导入受体细胞
③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求 ④获取目的基因
A．③②④① B．②④①③ C．④①②③ D．③④①②
17．将目的基因导入微生物细胞之前，要用Ca2+处理细胞，处理过的细胞叫
A．感受态细胞 B．敏感性细胞 C．吸收性细胞 D．接受态细胞
18．下列有关基因工程中运载体的说法正确的是
A．在进行基因工程操作中，被用作运载体的质粒都是天然质粒
B．所有的质粒都可以作为基因工程中的运载体
C．质粒是一种独立于细菌染色体外的链状DNA分子
D．作为载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA进行鉴定和选择的标记基因
19．有关PCR技术的说法，不正确的是
A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术
B．PCR技术的原理是DNA双链复制
C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列
D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA
20．“分子缝合针”DNA连接酶缝合的部位是
A．碱基对之间的氢键 B．碱基与脱氧核糖
C．DNA双链上的磷酸二酯键 D．脱氧核糖与脱氧核糖
21．下列技术依据DNA分子杂交原理的是
①用DNA分子探针诊断疾病 ②B淋巴细胞与骨髓瘤细胞杂交
③快速灵敏地检测饮用水中病毒的含量 ④目的基因与运载体结合形成重组DNA分子
A．②③ B．①③ C．②④ D．①④
22．在不损伤高等植物细胞内部结构的情况下，下列哪种物质适合于除去细胞壁
A．蛋白酶 B．盐酸 C．淀粉酶 D．纤维素酶
23．在植物组织培养过程中，愈伤组织的形成和形态的发生是十分关键的。这除需要必备的营养和一些刺激因素外，还需要有诱导作用的物质，即
A．铜、锌等微量元素 B．细胞分裂素和生长素
C．蔗糖和葡萄糖 D．维生素和氨基酸
24．植物体细胞杂交是利用不同物种的两个体细胞融合成一个杂种细胞的过程。该过程是指
A．不同植物的精子与卵细胞的融合 B．不同植物的原生质体的融合
C．完整的两个植物体细胞的融合 D．植物花粉细胞的两两融合
25．关于动物细胞融合的说法不正确的是
A．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程
B．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞
C．常用于诱导动物细胞融合手段有：聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射
D．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
26．从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙的去核卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状
A．难以预测 B．像甲 C．像乙 D．像丙
27．将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，其依据是
A．骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖
B．B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合才能产生抗体
C．骨髓瘤细胞可以无限增殖，且能产生抗体
D. B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖，骨髓瘤细胞可以无限增殖
28．生物体内细胞没有表现出全能性，而是分化为不同的组织器官，因为
A．细胞丧失了全能性
B．基因的选择性表达
C．不同的细胞内基因不完全相同
D．在个体发育的不同时期，细胞内的基因发生了变化
29．动物细胞融合技术的目的中最重要的是
A．克服远缘杂交不亲和的障碍 B．制备单克隆抗体
C．培育新物种 D．生产杂种细胞
30．2001年意大利科学家将欧洲盘羊的体细胞核注入去核家养绵羊的卵细胞中，成功克隆出濒危哺乳动物——欧洲盘羊。这属于下列哪项技术的研究成功
A．基因工程 B．动物细胞工程 C．体外受精 D．杂交育种
31．为了使用于培养的动物组织细胞分散开来以配制一定浓度的细胞悬浮液，选取动物组织后应选用哪种物质处理
A．胃蛋白酶 B．胰蛋白酶 C．果胶酶 D．胰脂肪酶
32．“胡萝卜一羊角芹”是用何种技术培育出来的植物新品种
A．转基因技术 B．植物细胞工程 C．酶工程 D．杂交育种
33．下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过程注射的物质和A细胞的名称分别为
A．抗体、T淋巴细胞 B．抗原、T淋巴细胞
C．抗体、B淋巴细胞 D．抗原、B淋巴细胞
34．下列不是精子、卵子发生过程的区别的是
A．初级精母细胞和初级卵母细胞的形成时间
B．MI和MII的时间连续性
C．成熟生殖细胞是否经过变形
D．成熟生殖细胞中染色体的数量
35．不能作为人工诱导原生质体融合的方法是
A．振动 B．电刺激 C．PEG试剂 D．重压
36．关于精子变形的叙述错误的是
A．细胞核变为精子头部的主要部分
B．高尔基体发育为头部的顶体
C．中心体演变为精子的尾
D．线粒体退化消失
37.对转基因食品的安全性评估应做到多环节，下面哪些属于对转基因食品安全性评估的环节（ ）
转基因农作物的研究 转基因农作物的农田试种
转基因农作物的大面积种植 „ 转基因食品的商品化
A. B. C. D.„
38.下列哪项明显体现了转基因生物引发的食物安全问题（ ）
A．转基因猪的细胞中含有人的生长激素基因，因而猪的生长速度快，个体大
B．转基因大米中含有β一胡萝卜素，营养丰富，产量高
C．转基因植物合成的某些新蛋白质，引起个别人过敏
D．让转基因牛为人类生产凝血因子，并在牛奶中提取
39．引发伦理问题的生物技术主要包括（ ）
①克隆人 ②设计试管婴儿 ③基因身份证 ④转基因生物
A．①② B．①②③
C．①②③④ D．④
40．下图中表示一项重要生物技术的关键步骤，字母X最可能代表
A．不能合成胰岛素的细菌细胞 B．能合成抗体的细菌细胞
C．能合成胰岛素的细菌细胞 D．不能合成抗生素的细菌细胞
二、简答题：
1．（10分）据调查，随着化学农药的产量和品种逐年增多，害虫的抗药性也不断增强，造成的危害很严重，如近年来，棉铃虫在我国大面积暴发成灾，造成严重经济损失。针对这种情况，经研究发现寄生在棉铃虫消化道内的苏云金芽孢杆菌能分泌一种毒蛋白，它能使寄主至死而对人畜无害。我国科技工作者已成功地将该毒蛋白基因导入棉花植株体内并实现表达。由于棉铃虫吃了这种“转基因抗虫棉”就会死亡，所以该种棉被推广后，收到了很好的经济效益。
请据以上材料，回答下列问题：
⑴害虫抗药性的增强是__________________________的结果。
⑵“转基因”抗虫棉的培育应用了_______________技术。抗虫棉的具体培育过程包括 、 、 、
⑶在培育转基因抗虫棉的过程中，所用基因的“剪刀”是_______________，基因的“针线”是__________，基因的“运载工具”是________________。
⑷该科技成果在环保上的重要作用是
___________________________________________。
2.（10分）下图为细胞融合的简略过程，请据图回答：
⑴若A、B是植物细胞，在细胞融合之前须处理获得原生质体，由A、B到细胞C的过程中，常用的促融剂是__________________。融合完成的标志是_____________。
⑵若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用______________技术把D培养成植株。
⑶若A、B是动物细胞，一般取自_____________，然后用_____________使其分散开来；由A、B到C的过程中，常用的且不用于植物细胞融合的手段是________________。A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有______________________________。
⑷若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，两两融合所形成的C有_____种，用来培养的D细胞应该是_____________________，获得D后，常用的培养方法是培养液中培养和 ________________________。
3．（8分）下列是制备分泌抗原X抗体的过程，根据图解回答问题：
⑴制备单克隆抗体的步骤：
①将__________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。
②将步骤①获得的B淋巴细胞与步骤②培养的骨髓
瘤细胞在________________________________的
诱导下融合。
③将诱导后产生的多种细胞，放在含________培养基的多孔培养板上培养，筛选。
④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞
__________________的能力，又具有
___________________________________的本领。
⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。
⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗
原的单克隆抗体。
⑵单克隆抗体是由同样的抗体分子组成，与一般
的血清抗体相比，单克隆抗体的优点是
_______________________________________。
⑶用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为
它是用小鼠的_____________细胞制备的，其化学本质是___________，对人类有异物性和免疫原性。
4.（6分） 为了大力发展我国的肉牛和奶牛养殖业，科学家们在育种途径中进行了大胆探索，并取得了初步成果。
I.（3分）
2002年1月中旬到2月中旬，中国自主完成的首批成年体细胞克隆牛在山东曹县五里墩陆续降生。克隆牛有3个母亲，A牛提供细胞核即供体细胞，B牛提供去除细胞核的卵细胞即受体细胞，两种细胞在电脉冲的刺激下融合之后，通过细胞分裂形成早期胚胎，再将这个胚胎植入C牛子宫内。请回答下列问题：
(1)培养出的克隆牛几乎是 牛复制品。这是因为控制牛性状遗传的物质主要存在于
________________________中。
(2)如果多个供体细胞来自同一头牛，培育的这些牛在性状上也不完全相同，分析其原因，下列哪些叙述是正确的( )（多选）
A. 性状变异可由环境条件引起 B. 基因可能会发生突变
C. 受体细胞的细胞质基因不同 D. 细胞核基因发生了重组
Ⅱ.（3分）
在克隆技术出现之前，育种工作者已经开始采用胚胎分割移植的方法尽快繁育更多的优质牛。这种育种技术的主要步骤是：将经过人工授精得到的受精卵在试管内培养到8个细胞的胚胎时，进行胚胎分割，均分为4等份，再分别移植到多头母牛的子宫内发育、分娩，就能得到多头所需要的小牛。
(1)胚胎分割移植要在受精卵培养到8个细胞的卵裂期时进行，其主要原因是 。
(2)通过胚胎分割移植培育出的这些小牛，其性别表现为 。
A. 雌、雄的可能性各占50％ B. 全为雌性或全为雄性
C. 全为雌性 D. 全为雄性
(3)通过体细胞克隆技术培育的小牛，其性别则取决于 。这样人们就可以根据需要，有目的地控制小牛的性别。
5.（6分）根据下述材料，回答下列问题：
细胞在分化过程中往往由于高度分化而完全失去再分裂的能力，最终衰老死亡。但机体在生长发育过程中保留了一部分未分化的原始细胞，一旦需要，这些原始细胞能够按照发育途径通过分裂而产生分化细胞，以保证局部组织损伤的修复。
（1）根据分裂潜能，干细胞可分为全能干细胞（可发育成完整个体）、多能干细胞（可发育成多种组织和器官）和专能干细胞（发育成专门的组织和器官），则这种细胞在个体发育中的分化顺序是（ ）
A．全能→专能→多能 B. 全能→多能→专能
C．多能→全能→专能 D. 专能→全能→多能
（2）个体发育过程中最原始的细胞是 。
（3）如果治疗性克隆研究获得成功，病人将可以轻易地获得与自己完全匹配的移植器官，不会产生 反应。假设有一个人患有糖尿病、进行性老年痴呆、严重的心力衰竭或其他疾病，如果从他自己身上一定部位提取一些干细胞，通过技术，在体外培养发育成 ，并在体外诱导它们形成胰岛细胞、神经元、心肌细胞等，再将这些细胞移植至发病部位，则能够修复病人的组织或器官，从而使病人免受病魔的煎熬。
（4）在胚胎干细胞用于治疗性克隆过程中，要把胚胎干细胞放在一定的条件下通过
和 形成不同的组织和器官，然后才能进行移植。
一、选择题
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
答案 D B B B B D C D A C D
题号 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
答案 C A C B C A D D C B D
题号 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33
答案 B B C B D B B B B B D
题号 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44
答案 D D D D C B C
二、简答题
1． ⑴（自然选择）农药对害虫的抗药性变异进行了选择
⑵ 基因工程 抗虫基因的获取 基因表达载体的建构 目的基因导入受体细胞
目的基因检测和鉴定
⑶ 限制性核酸内切酶（限制酶） DNA连接酶 运载体
⑷ 减少农药用量 减轻环境污染
2． ⑴ 聚乙二醇 形成细胞壁
⑵ 植物组织培养
⑶ 幼龄动物或胚胎 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 灭活的病毒 一定的流动性
⑷ 3 杂交瘤细胞 注入小鼠腹腔内培养
3． ⑴ ① 抗原 ② 物理方法或化学方法（聚乙二醇PEG）、灭活的病毒
③ 选择性 ④ 产生专一抗体、无限增殖
⑵ 灵敏度高、特异性强、纯度高
⑶ B淋巴 蛋白质
4（6分）
Ⅰ (1) A 细胞核 (2)ABC
Ⅱ (1) 此时还未出现细胞分化 (2) B (3)供体细胞
5（6分）
（1） B （2）受精卵 (3 ) 免疫排斥 早期胚胎 （4）离体培养 诱导分化
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种,方法有很多种，你先面很全面，可以看下。
实验室常用微生物菌种的分离和纯化方法
发布日期：2010-03-01 浏览次数：18
从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离
从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。
1、用固体培养基分离和纯化
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板的简称，它是指固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。
1.1 稀释倒平板法
首先把微生物悬液作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。
1.2 涂布平板法
因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的微生物悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落（图1）。
图1 涂布平板法
1.3 平板划线法
最简单的分离微生物的方法是平板划线法，即用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行连续划线（图2），微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
图2 平板划线法
1.4 稀释摇管法
用固体培养基分离严格厌氧菌有特殊性，如果该微生物暴露于空气中不立即死亡，可以采用通常的方法制备平板，然后置放在封闭的容器中培养，容器中的氧气可采用化学、物理或生物的方法清除。对于那些对氧气更为敏感的厌氧性微生物，纯培养的分离则可采用稀释摇管培养法进行，它是稀释倒平板法的一种变通形式。先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。培养后，菌落形成在琼脂柱的中间。进行单菌落的挑取和移植，需先用一只灭菌针将液体石蜡--石蜡盖取出，再用一只毛细管插入琼脂和管壁之间，吹入无菌无氧气体，将琼脂柱吸出，置放在培养皿中，用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植。
2、用液体培养基分离和纯化
大多数细菌和真菌，用平板法分离通常是满意的，因为它们的大多数种类在固体培养基上长得很好。然而迄今为止并不是所有的微生物都能在固体培养基上生长，例如一些细胞大的细菌、许多原生动物和藻类等，这些微生物仍需要用液体培养基分离来获得纯培养。
稀释法是液体培养基分离纯化常用的方法。接种物在液体培养基中进行顺序稀释，以得到高度稀释的效果，使一支试管中分配不到一个微生物。如果经稀释后的大多数试管中没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。如果经稀释后的试管中有微生物生长的比例提高了，得到纯培养物的机率就会急剧下降。因此，采用稀释法进行液体分离，必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。
3、单细胞（孢子）分离
只能分离出混杂微生物群体中占数量优势的种类是稀释法的一个重要缺点。在自然界，很多微生物在混杂群体中都是少数。这时，可以采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养，称为单细胞（或单孢子）分离法。单细胞分离法的难度与细胞或个体的大小成反比，较大的微生物如藻类、原生动物较容易，个体很小的细菌则较难。
较大的微生物，可采用毛细管提取单个个体，并在大量的灭菌培养基中转移清洗几次，除去较小微生物的污染。这项操作可在低倍显微镜，如解剖显微镜下进行。对于个体相对较小的微生物，需采用显微操作仪，在显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。在没有显微操作仪时，也可采用一些变通的方法在显微镜下进行单细胞分离，例如将经适当稀释后的样品制备成小液滴在显微镜下观察，选取只含一个细胞的液体来进行纯培养物的分离。单细胞分离法对操作技术有比较高的要求，多限于高度专业化的科学研究中采用。
4、选择培养分离
没有一种培养基或一种培养条件能够满足一切微生物生长的需要，在一定程度上所有的培养基都是选择性的。如果某种微生物的生长需要是已知的，也可以设计特定环境使之适合这种微生物的生长，因而能够从混杂的微生物群体中把这种微生物选择培养出来，尽管在混杂的微生物群体中这种微生物可能只占少数。这种通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术称为选择培养分离，特别适用于从自然界中分离、寻找有用的微生物。自然界中，在大多数场合微生物群落是由多种微生物组成的，从中分离出所需的特定微生物是十分困难的，尤其当某一种微生物所存在的数量与其它微生物相比非常少时，单采用一般的平板稀释法几乎是不可能的。要分离这种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养分离的方法。或抑制使大多数微生物不能生长，或造成有利于该菌生长的环境，经过一定时间培养后使该菌在群落中的数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯培养分离。
4.1 利用选择平板进行直接分离
根据待分离微生物的特点选择不同的培养条件，有多种方法可以采用。例如要分离高温菌，可在高温条件下进行培养；要分离某种抗菌素抗性菌株，可在加有抗菌素的平板上进行分离；有些微生物如螺旋体、粘细菌、蓝细菌等能在琼脂平板表面或里面滑行，可以利用它们的滑动特点进行分离纯化，因为滑行能使它们自己和其它不能移动的微生物分开。可将微生物群落点种到平板上，让微生物滑行，从滑行前沿挑取接种物接种，反复进行，得到纯培养物。
4.2 富集培养
富集培养法原理和方法非常简单，利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，很容易地分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点从物理、化学、生物、及综合多个方面进行选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等等许多方面。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，最后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。
5、二元培养物
分离的目的通常是要得到纯培养。然而，在有些情况下这是很难做到的。但可用二元培养物作为纯化培养的替代物。含有二种以上微生物的培养物称为混合培养物，而如果培养物中只含有二种微生物，而且是有意识的保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。例如二元培养物是保存病毒的最有效途径，因为病毒是细胞生物的严格的细胞内寄生物。有一些具有细胞的微生物也是严格的其它生物的细胞内寄生物，或特殊的共生关系。对于这些生物，二元培养物是在实验室控制条件下可能达到的最接近于纯培养的培养方法。另外，猎食细小微生物的原生动物也很容易用二元培养法在实验室培养，培养物由原生动物和它猎食的微生物二者组成。例如，纤毛虫、变形虫和粘菌。
在以上介绍的几种方法中，平板分离法普遍用于实验室微生物的分离与纯化。微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。
1.实验目的
初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下基础。
实验原理 2.
从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。近年来，在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的研究领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕的成果。
细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。
为了进取细胞培养，首先要从生物体的体细胞，目前或许或有两种，一种是。提取血液，另一种是取标本。
植物体的细胞中，含有该植物所有的遗传信息。 在合适的条件下，一个细胞可以独立发育成完整的植物体。 利用细胞的这种全能性，生物学家通过组培来繁殖名贵花卉、消灭果树上的病毒，以及通过对细胞核物质的重新组合，进行植物遗传改造等。这就是人们常说的植物细胞工程
是的分离法，我觉得分离法很正确，
答：(2)动物细胞培养的流程:取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。(3)细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为...
答：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程,称为植物细胞的脱分化,或者叫做去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗,移栽到地里,可以发育成完整的植物体。 植物组织培养一般的的流程 植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS...
答：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程,称为植物细胞的脱分化,或者叫做去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗,移栽到地里,可以发育成完整的植物体。 植物细胞工程 具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞,都具有发育成完整个体的...
答：在收集细胞培养上清时，低速离心去除杂质后，进行二次纯化，通过不同转速离心和合并上清，确保上清中含有纯净的外泌体。收集后立即冷冻保存，以保持外泌体活性和质量。外泌体提取与鉴定的艺术 天津舍为斯生物技术有限公司提供成熟的超速离心法和外泌体提取试剂盒服务。为了确保提取的准确性，外泌体需要经过...
答：探索细胞世界的接力：细胞传代的奥秘当我们从生物体中精细提取出那一颗颗具有神奇生命力的细胞时，它们仿佛是科学探索的种子，拥有自我复制和分化的能力。在实验室的培养皿中，这些细胞如同细胞世界的小小居民，遵循着自然的法则。然而，随着细胞数量的增长，它们不可避免地会遇到空间的限制，形成“接触抑制”...
答：基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体;细胞工程中更是离不细胞培养,杂交瘤单克隆抗体,完全是通过细胞培养来实现的,既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现,发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之,细胞培养在整个生物技术产业...
答：如今,克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖,以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。克隆也可以理解为复制、拷贝,就是从原型中产生出同样的复制品,它的外表及遗传基因与原型完全相同。 1997年 2月,绵羊“多利”诞生的消息披露,立即引起全世界的关注,这头由英国生物学家通过克隆技术培育的克隆...
答：植物组织培养出来的植株是单倍体么？ 不全是，这取决于你用什么材料做组培，假如你是用植株的花粉或者卵细胞做培养的则是单倍体；但如果你是直接取植株的其他任一器官或组织来培养，则染色体数目跟你所用植株的染色体一样 植物组织培养中,进行单倍体培养需要注意的问题有哪些? 单倍体培养主要是指...
答：实验二 土壤中微生物分离纯化培养实验三 菌种保藏实验四 细菌形态观察及单染色实验五 放线菌及霉菌形态观察实验六 革兰氏染色及芽孢染色实验七 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定实验八 微生物直接计数法及测微技术实验九 大肠杆菌生长曲线的测定实验十 水中细菌总数的测定实验十一细菌细胞的生化反应实验实验十二噬菌体...
答：细胞工程，这门生物学领域的前沿技术，巧妙地结合了细胞生物学和分子生物学的原理，通过精细操作在细胞器或细胞层面进行干预，旨在改变细胞的遗传物质，从而创造独特的细胞产品。这项技术主要分为两大类别——植物细胞工程和动物细胞工程，每一种都蕴含着独特的科学魅力。1. 植物细胞工程：植物组织培养与体...
