如何用triton-X100 裂解细胞
多少浓度的triton-100可以破细胞膜
Triton X-100是一种非离子型去垢剂分子式：C14H22O(C2H4O)n 用途：Triton X-100是一种比较温和的去垢剂（表面活性剂或称界面活性剂）,常作为添加剂使蛋白保持稳定,尤其是膜蛋白. 性质： 1.Triton X-100对细菌等微生物没有杀伤作用. 2.Triton X-100在紫外波段下有光吸收（lambda max = 275 nm and 283 nm in methanol）,因此,当缓冲液中存在Triton X-100时不能通过测定280nm光吸收来进行蛋白定量. 3.Triton X-100常与CHAPS等zwitterionic 去垢剂一起使用来纯化膜蛋白,使膜蛋白保持其天然构象. 4.Triton X-100可以提高真核细胞细胞膜的通透性,因此在Immunostaining时常使用含 0.1%-0.5%Triton X-100的PBS或TBS. 5.Triton X-100非常稳定,密封避光 +2 to +8℃条件下可以长期保存. 6.Triton X-100是透明,略显粘稠,稍微发黄的液体. 7.Triton X-100的密度为1.07 g/ml,pH6.0-8.0（5%的溶液）. 8.Triton X-100可以高压灭菌. 9.用Triton X-100来裂解细胞时,0.1% Triton X-100就足够了,不过,达到0.5%时也没问题. 10.蛋白酶K在含1% Triton X-100的溶液中依然保持活性. 11.可以使用Amberlite hydrophobic XAD resins and Rezorian A161 cartridges 来去除Triton X-100 . 去垢剂(又称表面活性剂)是一类即具有亲水基又具有疏水基的物质,一般具有乳化、分散、和增溶作用,可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型,中性去垢剂在蛋白提取中应用的较多. 中性去垢剂又称非离子表面活性剂,对蛋白质的变性作用影响较少,宜于蛋白质或酶提取之用.一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类,如PEG200；多元醇类表面活性剂,如山梨醇、司盘类和吐温类；聚氧乙烯脂肪醇醚,如苄泽类、平平加类；聚氧乙烯烷基苯酚醚,如Igepal CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌.中性去垢剂作用后可通过Sephadex LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱层析分离目的蛋白,不必先除去去垢剂.
细胞核内蛋白除了需要高浓度的去垢剂外还需要物理破碎
1:单去污剂裂解液:1mol/L Tris·HCl（pH8.0） 2.5mlNaCl 0.438gTritonX-100 0.5ml蒸馏水至 50ml混匀后4℃保存.使用时,加入PMSF至终浓度为100μg/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）.（一般实际用的比较多的其实是RIPA裂解配方：50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM PMSF、1 mM EDTA、1% Triton x-100、1%脱氧胆酸钠、0.1% SDS)2:裂解细胞的步骤:常规胰酶消化将胰酶吸出加入培养基将细胞吹打起来将细胞收集到EP管中,离心 2000r/min,5min.用PBS洗三次,离心同上,弃上清加入细胞裂解液（视细胞的数量而定,一般每孔100～150ul）冰上孵育5～10min,离心12000r/min,5min,收集上清.3:triton－X100 对检测结果无影响的