DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-06-28
提取DNA主要有SDS和CTAB法，其实提取效果的好坏主要看提取的对象是什么样的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在设计实验步骤。
一）CTAB法
CTAB是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7
mol/L
NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3
mol/L
NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。
（二）SDS法
利用高浓度的SDS，在较高温度（55—65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的做法使蛋白质及多糖杂质沉淀（最常用的是加入5M的KAc于冰上保温，在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
以下是在提取热带水果DNA时设计的两种不同方法步骤，对比起来CTAB法好，在禾本科植物效果差不多！
1、
CTAB法
1）
在所需量的CTAB抽提液中加入2－巯基乙醇，使终浓度达2％（v/v）。将此溶液预热至65℃。
对于每克新鲜的叶组织大约需要4ml的2－ME/CTAB抽提液。
2）
用液氮（－196℃）或干冰（－78℃）冷却粉碎器/匀浆器，将0.5
g植物组织粉碎成细粉，然后将组织转移到2.0
ml离心管。
3）
加入800
µl预热的2－Me/CTAB，混合使之充分湿润，于65℃温育20
min，不时颠倒混匀。
4）
待冷至室温后，加入800
µl氯仿/异戊醇（24：1），颠倒混匀至溶液呈乳浊状----但不要振荡。25℃，10000
rpm离心10
min。
5）
上清（~700
µl）转移至另一干净的离心管中，加入5
µl
RNaseA贮液，37℃温育30
min。
6）
加入700
µl氯仿/异戊醇，颠倒混匀，25℃，10000
rpm离心10
min。
7）
上清（~600
µl）转移至另一干净的1.5
ml离心管中，加入600
µl异丙醇，颠倒混匀，室温或-20℃放置20
min。
8）
25℃，12000
rpm，离心10
min，收集沉淀。
9）
去上清，加1
ml70%乙醇洗涤沉淀两次。（25℃，12000
rpm，离心10
min）
10）凉干DNA，溶于50
µl
ddH2O，4℃保存备用。
2、
SDS法
①
将0.3
g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2
ml离心管中。
②
加入1.2
ml预热至65℃的提取缓冲液（其中加入3
μl
β—巯基乙醇，增加DNA的稳定性），置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。。
③
加入0.45
ml
5M的醋酸钾，混匀，冰浴20分钟，在10000
rpm离心20
min。需要的话，Miracloth纱布过滤除去沉淀，上清液转入另一离心管中。
④
加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀，12000
rpm离心15
min。
⑤
转移上清液到另一新离心管中，加5
μl
RNaseA贮液，37℃温育30
min。
⑥
加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀，12000
rpm离心15
min。
⑦
转移上清液到另一新离心管中，加入0.7V异丙醇，轻轻颠倒混匀，-20℃放置30分钟沉淀核酸。
⑧
25℃，12000
rpm，离心10
min，收集沉淀。
⑨
弃上清，70％乙醇洗两次。
⑩
凉干DNA，溶于50
µl
ddH2O，4℃保存备用。
DNA的提取方法有多少种
答：DNA的提取方法有7种：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。DNA的提取原则 1、保证核酸一级结构的完整性；2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污...
DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些
答：2、 SDS法 ① 将0.3 g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2 ml离心管中。② 加入1.2 ml预热至65℃的提取缓冲液（其中加入3 μl β—巯基乙醇，增加DNA的稳定性），置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。。③ 加入0.45 ml 5M的醋酸钾，混匀，冰浴20分钟，在10000 r...
DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些
答：DNA实验室常用的DNA提取方法主要有以下几种：酚氯仿抽提法、盐析法、试剂盒法以及磁珠法。酚氯仿抽提法是早期常用的DNA提取方法。这种方法利用酚和氯仿的有机溶剂特性，破坏细胞膜和蛋白质，使DNA从细胞中释放出来。通过多次抽提和离心，可以去除杂质，得到较纯净的DNA。但此方法操作繁琐，耗时较长，且对...
提取基因组DNA的方法有哪些?各有何优缺点?
答：2、离心柱法 离心柱法DNA提取它的优点是比传统的酚氯法提取的纯度高，有利于RNA保护，而且能进行微量操作，以其低廉的价格和相对便捷的操作，渐逐取代了传统DNA提取方法，被高校科研所等市场普遍接受。离心柱法DNA提取的缺点是需要较多的样本，耗材多，对于珍稀样本无能为力，特别是在法医、考古等领域显...
dna提取方法有哪些
答：1. 酚-氯仿抽提法。这是一种传统的DNA提取方法，主要利用酚和氯仿的抽提作用来去除蛋白质和其他杂质，从而得到DNA。该方法适用于各类生物样本，包括血液、组织等。操作过程需要精细控制，以确保DNA的完整性和纯度。2. 盐析法。盐析法是通过改变溶液中的盐浓度，使DNA与蛋白质等杂质分离。这种方法相对简单...
DNA的提取与鉴定?
答：你是说DNA 的提取方法么？现在正在做这方面试验，希望能帮得上你 1) 研磨：取样少许置入1.5ml离心管中，以移液枪加入消化缓冲液600μl，冲入液氮或少许石英砂研磨至澄清。2) 水浴：水浴温度55℃，水浴时间3-5h左右 3) 酚抽提：每支离心管中加入600μl Tris饱和酚，轻柔的摇晃使固液混合充分。
dna提取实验步骤是什么?
答：分别用66%，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤，最后在空气中干燥，既得DNA样品。此法提取的DNA中蛋白质含量较高，故一般不用。为除蛋白可将此法加以改良，在提取过程中加入SDS。一般学校实验室较为简单的教学就用这个方法。提取原则 1、保证核酸一级结构的完整性；2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有...
细胞DNA提取试剂的选择
答：一般先提取105-106的细胞量（最好不超过107 Cell，可用细胞计数方法进行细胞计数），如结果不理想可考虑增加细胞量。但如果增加细胞量还不能得到满意结果，应及时考虑更换试剂盒。目前国内常用的细胞DNA提取试剂有国外品牌Q，国产品牌Biog和T等。根据我们的经验，Q细胞DNA的提取得率，一般107细胞样本在40-...
纯化dna的方法有哪些
答：纯化DNA的常用方法是用酚抽提-乙醇沉淀法，适用于普通实验室操作。它通过交替使用苯酚、氯仿两种不同的蛋白质变性剂，可以增加去除蛋白质杂质的效果；氯仿可以去除核酸溶液中的微量酚，还可以加快有机相与液相混合，去除色素和蔗糖；在氯仿中加入少量的异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。【实验...
如何提取细胞总DNA?
答：经过苯酚、氯仿抽提。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。要使用特殊纯化的质粒时，可采用氯化铯方法抽提，但该方法比较复杂，对技术要求高，花费时间长，也比较昂贵。
一）CTAB法
CTAB是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7
mol/L
NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3
mol/L
NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。
（二）SDS法
利用高浓度的SDS，在较高温度（55—65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的做法使蛋白质及多糖杂质沉淀（最常用的是加入5M的KAc于冰上保温，在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
以下是在提取热带水果DNA时设计的两种不同方法步骤，对比起来CTAB法好，在禾本科植物效果差不多！
1、
CTAB法
1）
在所需量的CTAB抽提液中加入2－巯基乙醇，使终浓度达2％（v/v）。将此溶液预热至65℃。
对于每克新鲜的叶组织大约需要4ml的2－ME/CTAB抽提液。
2）
用液氮（－196℃）或干冰（－78℃）冷却粉碎器/匀浆器，将0.5
g植物组织粉碎成细粉，然后将组织转移到2.0
ml离心管。
3）
加入800
µl预热的2－Me/CTAB，混合使之充分湿润，于65℃温育20
min，不时颠倒混匀。
4）
待冷至室温后，加入800
µl氯仿/异戊醇（24：1），颠倒混匀至溶液呈乳浊状----但不要振荡。25℃，10000
rpm离心10
min。
5）
上清（~700
µl）转移至另一干净的离心管中，加入5
µl
RNaseA贮液，37℃温育30
min。
6）
加入700
µl氯仿/异戊醇，颠倒混匀，25℃，10000
rpm离心10
min。
7）
上清（~600
µl）转移至另一干净的1.5
ml离心管中，加入600
µl异丙醇，颠倒混匀，室温或-20℃放置20
min。
8）
25℃，12000
rpm，离心10
min，收集沉淀。
9）
去上清，加1
ml70%乙醇洗涤沉淀两次。（25℃，12000
rpm，离心10
min）
10）凉干DNA，溶于50
µl
ddH2O，4℃保存备用。
2、
SDS法
①
将0.3
g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2
ml离心管中。
②
加入1.2
ml预热至65℃的提取缓冲液（其中加入3
μl
β—巯基乙醇，增加DNA的稳定性），置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。。
③
加入0.45
ml
5M的醋酸钾，混匀，冰浴20分钟，在10000
rpm离心20
min。需要的话，Miracloth纱布过滤除去沉淀，上清液转入另一离心管中。
④
加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀，12000
rpm离心15
min。
⑤
转移上清液到另一新离心管中，加5
μl
RNaseA贮液，37℃温育30
min。
⑥
加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀，12000
rpm离心15
min。
⑦
转移上清液到另一新离心管中，加入0.7V异丙醇，轻轻颠倒混匀，-20℃放置30分钟沉淀核酸。
⑧
25℃，12000
rpm，离心10
min，收集沉淀。
⑨
弃上清，70％乙醇洗两次。
⑩
凉干DNA，溶于50
µl
ddH2O，4℃保存备用。
答：DNA的提取方法有7种：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。DNA的提取原则 1、保证核酸一级结构的完整性；2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污...
答：2、 SDS法 ① 将0.3 g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2 ml离心管中。② 加入1.2 ml预热至65℃的提取缓冲液（其中加入3 μl β—巯基乙醇，增加DNA的稳定性），置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。。③ 加入0.45 ml 5M的醋酸钾，混匀，冰浴20分钟，在10000 r...
答：DNA实验室常用的DNA提取方法主要有以下几种：酚氯仿抽提法、盐析法、试剂盒法以及磁珠法。酚氯仿抽提法是早期常用的DNA提取方法。这种方法利用酚和氯仿的有机溶剂特性，破坏细胞膜和蛋白质，使DNA从细胞中释放出来。通过多次抽提和离心，可以去除杂质，得到较纯净的DNA。但此方法操作繁琐，耗时较长，且对...
答：2、离心柱法 离心柱法DNA提取它的优点是比传统的酚氯法提取的纯度高，有利于RNA保护，而且能进行微量操作，以其低廉的价格和相对便捷的操作，渐逐取代了传统DNA提取方法，被高校科研所等市场普遍接受。离心柱法DNA提取的缺点是需要较多的样本，耗材多，对于珍稀样本无能为力，特别是在法医、考古等领域显...
答：1. 酚-氯仿抽提法。这是一种传统的DNA提取方法，主要利用酚和氯仿的抽提作用来去除蛋白质和其他杂质，从而得到DNA。该方法适用于各类生物样本，包括血液、组织等。操作过程需要精细控制，以确保DNA的完整性和纯度。2. 盐析法。盐析法是通过改变溶液中的盐浓度，使DNA与蛋白质等杂质分离。这种方法相对简单...
答：你是说DNA 的提取方法么？现在正在做这方面试验，希望能帮得上你 1) 研磨：取样少许置入1.5ml离心管中，以移液枪加入消化缓冲液600μl，冲入液氮或少许石英砂研磨至澄清。2) 水浴：水浴温度55℃，水浴时间3-5h左右 3) 酚抽提：每支离心管中加入600μl Tris饱和酚，轻柔的摇晃使固液混合充分。
答：分别用66%，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤，最后在空气中干燥，既得DNA样品。此法提取的DNA中蛋白质含量较高，故一般不用。为除蛋白可将此法加以改良，在提取过程中加入SDS。一般学校实验室较为简单的教学就用这个方法。提取原则 1、保证核酸一级结构的完整性；2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有...
答：一般先提取105-106的细胞量（最好不超过107 Cell，可用细胞计数方法进行细胞计数），如结果不理想可考虑增加细胞量。但如果增加细胞量还不能得到满意结果，应及时考虑更换试剂盒。目前国内常用的细胞DNA提取试剂有国外品牌Q，国产品牌Biog和T等。根据我们的经验，Q细胞DNA的提取得率，一般107细胞样本在40-...
答：纯化DNA的常用方法是用酚抽提-乙醇沉淀法，适用于普通实验室操作。它通过交替使用苯酚、氯仿两种不同的蛋白质变性剂，可以增加去除蛋白质杂质的效果；氯仿可以去除核酸溶液中的微量酚，还可以加快有机相与液相混合，去除色素和蔗糖；在氯仿中加入少量的异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。【实验...
答：经过苯酚、氯仿抽提。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。要使用特殊纯化的质粒时，可采用氯化铯方法抽提，但该方法比较复杂，对技术要求高，花费时间长，也比较昂贵。
