如何根据紫外线分光光度法检测的RNAA260和A280结果分析RNA浓度与纯度?

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-08-06
RNA的浓度和A260/A280的比值是什么关系

RNA的浓度和A260/A280的比值呈正相关。
一般来说OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白质的吸光度。 A260/A280与OD260/OD280的意思是一样的。A代表吸光值,而OD是光密度值,二者含义一样。
蛋白中trp、tyr、phe的吸光度为280nm,所以280nm常用来表示蛋白质吸光度;而260nm为DNA的吸光度。
理论上,纯的RNA情况下:OD260/OD280的值为2,纯的DNA情况下:OD260/OD280的值为1.8.
OD260反映的是溶液中核酸的浓度,OD280反映的是溶液中蛋白质或者氨基酸的浓度。样品中如果含有蛋白质及苯酚,A260/A280比值会明显下降。对于纯的样品只要读出260 nm 的A值即可以算出含量。通常以A值为1相当于50微克/ml 双螺旋DNA,或者40微克/ml 单链DNA(RNA),或者20微克/ml 寡核苷酸计算。
①OD260/OD280=1.9~2.0 RNA居多,纯度已经很高了。
②纯DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;<1.6,表明有蛋白质、酚等污染)
③纯RNA:1.7 <OD260/OD280<2.0(2.0时表明可能有异硫氰酸残存)

RNA胶(凝胶成像)检测。例如:原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。
凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是:结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢,因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。RNA-seq即转录组测序技术,把mRNA,smallRNA等用高通量测序技术把RNA的序列测出来。反映出RNA的表达水平。
RNA纯度:RNA在纯化过程中容易受到DNA、蛋白质及有机溶剂的影响,这些残存物将会影响以后的操作。光谱分析(NANODROP)利用物质对不同波长光的吸收度的不同,可以鉴别出溶液纯度及浓度。

组成结构
RNA和DNA一样,也是由各种核苷酸通过3′,5′-磷酸二酯键连接构成的多核苷酸链,但与DNA有一系列差异。
在化学组成方面,RNA含核糖而不含脱氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是,每个tNA分子含有一个胸腺嘧啶,这是在RNA链合成后由尿嘧啶甲基化生的,此外,前面已提到,少数DNA含有少量核糖,但这些个别的例外并不能以此否定两类核酸组成上的差异。
以上内容参考:百度百科-核糖核酸

如果根据紫外线分光光度法,将测到他和她用户这个还是可以有专业的分析师根据籽的这个分析一汽,进行分析。

A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长,最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围,稀释bai或浓缩样品,使之在此范围内;如果吸光度小于0.05,检查是否存在操作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响。

DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。(请注意,这个值跟仪器无关,核酸的吸光度必需大于0.1,其值才有效和可靠,因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收,其值<0.1)。

扩展资料:

A260/A280是核酸纯度的指示值,纯度好的DNA,在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5,A260 / A280的比值, 用于评估样品的纯度, 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。

参考资料来源:百度百科-OD260/280比值



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A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长,最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围,稀释bai或浓缩样品,使之在此范围内,如果吸光度小于0.05,检查是否存在操作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响。

DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。(请注意,这个值跟仪器无关,核酸的吸光度必需大于0.1,其值才有效和可靠,因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收,其值<0.1)。

扩展资料

A260/A280是核酸纯度的指标。pH7-8.5条件下,纯度较好的DNA比例为2.0或2.5。A260/A280的比值用来评价样品的纯度,因为蛋白质的吸收峰在280nm。纯样品的比例大于1.8(DNA)或2.0(RNA)。比值低于1.8或2.0表示蛋白质或酚效应。

参考资料来源:百度百科-OD260/280比值



如何根据紫外线分光光度法检测的RNAA260和A280结果分析RNA浓度与纯度,足差不多的。

如果根据紫外线分光光度法,将测到他和她用户这个还是可以有专业的分析师根据籽的这个分析一汽,然后进行分析

紫外光的风,风光做法,这是一个画像。问题化学分析问题,所以咱们没法知道。青岛大学请教一下化学分析老师。

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