请教小鼠原代脂肪干细胞的形态及分离培养条件
肝脏是体内功能最多、最复杂的脏器，是一个物质合成、代谢与代谢 调节的场所，是生理和病理状态下，能量代谢、毒素的生物转化以及血浆蛋白质合成的中心器官，是机体最重要的器官之一。肝脏作为机体重要的代谢器官，一直倍 受关注，但由于体内研究受众多因素的影响，因而肝细胞培养作为一种体外研究手段，越来越多地被应用。由于肝细胞是一种分化程度很高的细胞，一旦失去体内生 存环境，则很快失去分化再生的能力，它的一些生化功能也很快丧失。
（转载，仅供参考）
(1)取BAT cell 的Isolationbuffer
按1：1000向其中加入p/s，4°C保存。Notice:用前按1~2mg/ml比例向Isolationbuffer中加入collagenase(c5138)，用滤器过滤消化液，并置于37°Cwater bath预热。(2) Steps:先热上medium(培养用,分离用,消化用)1）将新生Mice泡入70%EtoH 中约5mins进行消毒；(出生后两天内)2）剪开其肩部中间的外皮，两个镊子拨开皮肤,弯头镊子夹取其BAT（位于肩胛骨间的蝴蝶状组织，尽量勿取到其他多余组织）移入含PBS的60-mmdishes中；3）用PBS洗2~3遍；4）将BAT组织挑出来,在不含液体的情况下剪碎为1mm2的小块细碎的组织装进3ml含collagenase的Isolation buffer中；37°Cwater bath中消化30mins5）30min后将消化液用力甩，以使附着的cell散落；液体越浑浊说明震荡下来的细胞越多。6）用筛网将消化液过滤至15ml 离心管中，离心：200g，5min，弃上清；7）用Isolationbuffer（不含collagenase）吹起离心管底沉淀，混匀，离心：200g，5min，弃上清；8）用5ml 20%FBS-DMEM medium重悬cell，接于60-mmdishes中，培养，次日先用培养液清洗下再换液；取过很多次了，只要小鼠是出生2天内的就不会有问题的~！
脂肪来源干细胞（Adipose-DerivedStemCells,ADSCs)作为组织工程的种子细胞正受到越来越多的关注。 本实验采用一次消化多次收集与差速贴壁法分离小鼠腹股沟及附睾脂肪组织中的ADSC。通过倒置显微镜观察ADSC的一般形态；透射电子显微镜观察ADSC的超微结构；流式细胞术及激光共聚焦显微镜检测ADSC表面标志；利用特定的诱导液诱导ADSC分化及利用扫描电子显微镜观察ADSC与胶原支架的相容性。 结果显示ADSC呈长梭形或成纤维细胞样，旋涡状或束状交叉生长。ADSC细胞体积大，胞质内含有线粒体及粗面内质网等细胞器。ADSC的生长符合干细胞的生长规律，并可在体外稳定传至第9代。ADSC表达CD44及CD29，不表达CD34。成骨诱导剂诱导后，细胞内碱性磷酸酶表达量增加，细胞基质发生钙化。成脂肪诱导剂诱导后，细胞质内可见较多小脂滴。说明ADSC具有分化为成骨细胞及脂肪细胞的潜能。ADSC能够在胶原支架上铺展生长，说明其与胶原支架具有良好的相容性。 本实验建立了分离、培养小鼠ADSC的技术方法，为将来利用小鼠ADSC进行皮肤、肌腱、血管及神经组织修复的动物实验研究提供了前期实验基础和技术支持。
答：都是脂肪干细胞， 但不是很一样。 包括活力，分化潜能。
答：T细胞、效应T细胞、记忆细胞：骨髓中的一部分造血干细胞随血液流入胸腺，在胸腺内发育成T 淋巴细胞，大部分很快死亡，一部分在体内流动，受抗原刺激后，开始一系列增殖、分化，形成效应T 细胞和记忆细胞。效应T细胞参与细胞免疫，并释放淋巴因子，加强有关细胞的作用来发挥免疫效应。记忆细胞则当同一种抗原...
答：主要观察指标:倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞技术检测其表面标记物;碱性磷酸酶染色检测成骨分化能力;Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测成软骨分化能力.结果:原代及传代培养的胎儿骨髓间充质干细胞呈梭形外观,具有较强的增殖能力.胞体较小,细胞核/浆比例大,胞核呈圆形或...
答：6、传代细胞培养：原代培养形成的单层培养细胞汇合以后，需要进行分离培养(即将细胞从一个培养器皿中以一定的比率移植至另一些培养器皿中的培养)，否则细胞会因生存空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭，将影响细胞的生长，这一分离培养称为传代细胞培养。7、细胞融合：两个或多个细胞融合成一个双核细胞...
答：39、动物激素是内分泌腺或内分泌细胞分泌的,植物激素是植物体一定部位产生。 40、细胞周期:连续分裂,具有分裂能力。 具有细胞周期的细胞:植物根尖分生区、茎的形成层、动物各种干细胞,皮肤生发层细胞 暂时失去分裂细胞的细胞:肝脏、肾脏、黄骨髓 41、解离(15%盐酸和95%酒精)使根尖细胞相互分离,便于观察。按压为了使...
答：1.简述胚胎干细胞的形态、结构及应用。2.如何获得胚胎干细胞?1.卵母细胞采集、精子获取的方法2.体外受精之前,需要对精子和卵子作何处理?早期胚胎培养的培养液?3.体外受精主要包括哪几个步骤?4.胚胎移植的理论基础有哪些?胚胎移植有何优点?5.概述胚胎移植的基本步骤。6.图3-23:什么是胚胎分割?何时分割?如何操作...
答：细胞全能性:高度分化的植物细胞仍然具有发育成完整植株的潜在能力。 全能性表现最强的细胞是已启动分裂的干细胞; 受精卵具有最高全能性。 细胞癌变 细胞畸形分化。 致癌因子:物理、化学、病毒。 癌细胞由于原癌基因从抑制变成激活状态,使细胞发生转化而引起的。 特征:无限增殖;形态结构变化;细胞膜变化。 细胞衰老 是...
答：体细胞核移植 分离小鼠ES细胞并非只能从囊胚，也并非必须依赖饲养层细胞。Dhhaise等将52枚8-细胞小鼠胚胎消化成单个分裂球并培养于小鼠原代成纤维细胞饲养层上，所用培养基为DMEM/F12，并添加100 mL/L的胎牛血清、100 mL/L的新生犊牛血清和0.1 mmol/L的2-巯基乙醇，5天后，出现多个干细胞集落，消化...
答：不一定要无血清培养基培养。无血清培养的目的只是适合将来临床使用或者排除其他不确定成分因子影响基础研究的判断。你可以用含10%FBSDMEM:F12培养基培养好原代（0.1%gelatin包被，I型胶原酶至少消化40min以上），然后使用Sciencell的MSCM进行培养，效果还不错。
答：◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已...
