花卉病毒类似病害的诊断和鉴定方法有哪些？
植原体、螺原体等无壁菌门的原核生物造成的植物病害与植物病毒产生的症状相似，无病症表现，因此，它们又叫病毒类似病害。花卉上比较常见的是植原体病害，因此我们介绍一下植原体病害的诊断和鉴定。
1 超薄切片，电镜下观察植原体
方法如植物病毒的超薄切片和电镜观察。
2 抗生素治疗诊断
用四环素、土霉素和金霉素等对受病植株进行叶面喷施和灌根，植原体对这几种抗生素敏感，病害症状可以得到缓解。而植物病毒对抗生素不敏感，如果施用，对病害无效。
3 植原体PCR检测
根据植原体的共同保守序列，用植原体16S rRNA基因通用引物R16mRl/R16mF2进行植原体直接PCR扩增，可扩增到植原体的特异扩增带。
还可以将直接PCR产物分别稀释40倍后，引物换为R16R2/R16F2进行巢式PCR扩增，可得到与引物设计相符的植原体的特异扩增带，说明为植原体病害。
这里以仙人掌植原体丛枝病的PCR检测为例，介绍植原体的PCR检测技术。
实验操作如下：
Ⅰ.总核酸提取
（1）取0.3g植株幼嫩组织，用液氮冷冻后充分研磨成粉状。
（2）移入含有0.6ml预热到60℃的CTAB DNA提取缓冲液中，在60℃水浴中温浴30min。
（3）加入等体积酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），抽提30min。
（4）12000r/min离心8min，取上清液，重复（3）、（4）步直至蛋白质除尽。
（5）加入氯仿∶异戊醇（24∶1），抽提30min，12000r/min离心8min，取上清液。
（6）加入等体积预冷的异丙醇及1/10体积的醋酸钠（3mol/L，pH5.2），混匀，-20℃保持至少30min，14000r/min离心10min，使核酸沉淀。
（7）用70%乙醇洗涤2次后，.真空干燥。
（8）沉淀溶解于100μl TE缓冲液中。
（9）取10μl DNA经0.7%琼脂糖凝胶电泳后观察结果，计算DNA浓度。其余于-20℃冰箱中保存备用。
Ⅱ.PCR扩增
参照Lee所报道的植原体16S rRNA基因通用引物对R16mF2/R16mRl序列和R16F2/R16R2序列合成引物，引物序列如下：
R16mF2：5′-CATGCAAGTCGAACGGA-3′
R16mRl：5′-CTTAACCCCAATCATCGAC-3′
R16F2：5′-ACGACTGCTGCTAAGACTGG-3′
R16R2：5′-TGACGGGCGGTGTGTACAAACCCCG-3′
引物溶解于适量灭菌水中至终浓度为10μmol/L。
直接PCR（Direct-PCR）：
（1）取一PCR薄壁管，依次加入下列试剂
10×PCR反应缓冲液 5μl
5mmol/L MgCl2 4μl
2.5mmol/L dNTP 4μl
R16mF2（或R16F2） 3μl
R16mRl（或R16R2） 3μl
4U/μl 1TaqDNA聚合酶 1μl
模板 2μl
加入双蒸水至终体积为50μl，混匀并加入30μl石蜡油。
（2）PCR扩增。反应循环为95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火1min，72℃延伸90s，35个循环后于72℃保温10min，4℃冰箱中保存。
（3）取5μl PCR产物于1%琼脂糖凝胶检测PCR扩增结果。
巢式PCR（Nested-PCR）：
将用引物对R16mF2/R16mRl扩增的直接PCR产物按1∶40比例稀释后，作为反应模板，引物对换为R16F2/R16R2，退火温度升高至60℃，其余反应条件同直接PCR。
Ⅲ.结果
用植原体16S rRNA基因通用引物R16mRl/R16mF2进行植原体直接PCR扩增，可扩增到一条约1.5kb的特异扩增带（图1）。通过实验，用泡桐丛枝作为植原体的阳性对照，检测出YNOl样品（仙人掌品种珊瑚枝丛枝）和YNO2（仙人掌品种堆罗汉丛枝）为植原体病害。其他YNO3（仙人掌品种猪耳掌丛枝）、YNO4（仙人掌品种金狮子丛枝病）、YNO5（仙人掌品种青海波丛枝）不是植原体病害，可能为品种的特性。
图1 直接PCR扩增结果
将直接PCR产物分别稀释40倍后，引物换为R16R2/R16F2进行巢式PCR扩增，可得到一条约1.2kb的特异条带，与引物设计相符（图2），说明为植原体病害。直接PCR的检测灵敏度为10pg DNA，而巢式PCR可以提高检测灵敏度。使用直接PCR的检测得到比较模糊条带的，使用巢式PCR可以得到非常明显的条带。
图2 巢式PCR扩增结果
答：虫害会使花卉的长势减弱，抵抗力下降而容易遭受病害。虫咬的伤口往往是病原菌入侵的窗口，而且有些昆虫还可以传播病害，如蚜虫由于其口器中带有病毒，在吸食花卉汁液时会将病毒传染给花卉。另一方面，病害使花卉植株生长不良、抵抗力下降，也易遭受虫害。所以往往生虫的花卉也有病，生病的花卉上也有虫。判断...
答：我们知道不管园林花卉盆景植物，还是室内盆栽的养护，总逃不过病害和药害的侵袭，但是想要彻底的防治这些病害，从而做到对症下药，还得分得清什么是植物的细菌性病害、真菌性病害、病毒性病害、生理性病害以及药害这几种常见病害。要想辨别这些病害，首先得从病症以及病症的表现下手，另外再分析这些病症能否...
答：细菌性黑斑病，细菌借浇水或操作不当时，从叶片伤口或气孔侵入，高温时发病比较严重。细菌性病害发生的原因是用水不洁，植料没有充分消毒，通风不良，机械性损伤，生理性病害，属滋生性病菌，主要是要有一个好的环境，通风透气是关键。3、兰花病毒病：兰花的病毒病主要是一种过滤性，隐性病原体，多不在...
答：花卉盆景常见的病虫害有很多，严重会造成花卉彻底死亡。今天我们简单的介绍几种常见花卉的病虫害管理及防治方法。这些病虫害严重威胁的花卉的健康生长,因此种植人员需做好相应的防治措施
答：花卉植物病毒病田间观察与分析：田间观察对病害的诊断有着重要意义。病毒病害在症状上容易与非侵染性病害，特别是缺素症、空气污染所引起的病害相混淆。病毒病害的植株在田间一般是分散分布，发病株附近可以见到完全健康的植株，植株得病后往往不能恢复，而非侵染性病害多数为成片发病，这种病害通过增加营养和...
答：家庭花卉常见病虫害有白粉病、灰霉病、炭疽病、立枯病、介壳虫、红蜘蛛、蚜虫、叶蝉类以及蛾类等，一般处理方式都是及时喷洒虫药进行消毒杀菌，也可以进行无污染的防治法，如草木灰撒盆法、食醋擦拭法以及酒精涂擦法进行消毒。花卉种植中常见病害1、白粉病：花卉在进行养护的时候，经常会发生白粉病，在发病...
答：病害四：灰霉病 危害 随着气回升，湿度过大、通风不良，灰霉病仍然是室内花卉的主要病害之一。危害非洲菊、橡皮树、瓜叶菊、仙客来、一品红、天竺葵、丽格海棠、绿萝、龙船花、扶桑、红掌等盆栽花卉，特别是叶片、花瓣感病严重。解决方法 3月后，要加强通风透光，降低室内的空气湿度，禁止傍晚给...
答：真菌性病害从外部看来表现在腐烂变色、组织坏死、萎蔫畸形、溃烂猝倒等病状。细菌性病害细菌性病害植物感染细菌类病害的比例不多，多为急性坏死。细菌类病害的外部表现在，发病的部位会有斑点、溃疡，病灶上会出现水渍状、油渍状，菌脓。病毒性病害病毒性病害主要是病毒入侵感染引起的，危害的花卉植物种类...
答：（3）病毒病害。病毒病害病状主要有花叶、枯斑、环斑、丛枝、矮化、畸形等。花叶是病毒病常见的症状，叶片色泽深浅不均出现花斑。但病毒病害和非侵染性病害的症状有时难以区分，这时可借助传染性实验鉴别。（4）生理病害。生理性病害的病状常表现为叶尖、叶缘变褐焦枯，叶片变色、黄化、落叶、落花、...
答：但家庭养花经常会出现一些病虫害,这些病虫害不但影响花木的健康生长,而且还有碍观赏,如何防治病虫害这是爱养花的朋友经常探讨的问题。 一般来说,适宜家庭养植花卉生长和生存的环境条件同时也为许多病虫害的发生和流行创造了条件。病虫害发生的迟早首先取决于温度,而病虫危害的严重程度除受温度的影响外,主要取决于湿度...
