求助昆虫杆状病毒表达载体
蛋白表达定义 蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。在基因工程技术中占有核心地位。 编辑本段蛋白表达系统概述 蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系。通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。一般由以下几个部分组成： 1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同，适合表达蛋白的种类也不相同。 2、载体。载体的种类与宿主相匹配。根据宿主不同，分为原核（细菌）表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中含有外源基因片段。通过载体介导，外源基因可以在宿主中表达。 3、辅助成分。有的表达系统中还包括了协助载体进入宿主的辅助成分。比如昆虫-杆状病毒表达体系中的杆状病毒。 编辑本段蛋白表达系统分类及优劣分析 原核蛋白表达系统既是最常用的表达系统，也是最经济实惠的蛋白表达系统。原核蛋白表达系统以大肠杆菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点，缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制，如二硫键...
我认需要作酵母表达系统昆虫杆状病毒载体表达系统间作选择昆虫杆状病毒载体表达系统比较条件要求高、纯化比较难处没细胞培养技术条件选酵母表达系统比较些关于酵母表达系统我知道较少抱歉
昆虫表达系统类应用广泛真核表达系统具同数高等真核物相似翻译修饰加工及转移外源蛋白能力昆虫杆状病毒表达系统目前内外十推崇真核表达系统利用杆状病毒结构基角体蛋白强启构建表达载体使真核目基效甚至高水平表达具真核表达系统翻译加工功能二硫键形、糖基化及磷酸化等使重组蛋白结构功能更接近蛋白；其高表达量达昆虫细胞蛋白总量50%；表达非外源性基(200kD)；具同染昆虫细胞内同表达外源基能力；脊椎物安全由于病毒角体蛋白病毒总蛋白含量非高至今已外源基蛋白强启作用获高效表达用杆状病毒包括苜蓿银纹夜蛾核型角体病毒(AcNPV)家蚕型角体病毒(BmNPV)用宿主细胞则源于草夜蛾Sf9细胞用于表达外源基质粒源于PUC系列其含克隆位点角体蛋白启
杆状病毒系统主要点包括
1组蛋白具完整物功能蛋白确折叠、二硫键搭配
2蛋白翻译加工修饰；
3表达水平高达总蛋白量50%；
4容纳插入片段；
5能同表达基主要缺点外源蛋白表达处于极晚期病毒启调控由于病毒染细胞始死亡
昆虫表达系统是一类应用广泛的真核表达系统，它具有同大多数高等真核生物相似的翻译后修饰加工以及转移外源蛋白的能力。昆虫杆状病毒表达系统是目前国内外十分推崇的真核表达系统。利用杆状病毒结构基因中多角体蛋白的强启动子构建的表达载体，可使很多真核目的基因得到有效甚至高水平的表达。它具有真核表达系统的翻译后加工功能，如二硫键的形成、糖基化及磷酸化等，使重组蛋白在结构和功能上更接近天然蛋白；其最高表达量可达昆虫细胞蛋白总量的50%；可表达非常大的外源性基因(一200kD)；具有在同一个感染昆虫细胞内同时表达多个外源基因的能力；对脊椎动物是安全的。由于病毒多角体蛋白在病毒总蛋白中的含量非常高，至今已有很多外源基因在此蛋白的强大启动子作用下获得高效表达。常用的杆状病毒包括苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)和家蚕型多角体病毒(BmNPV)，常用的宿主细胞则来源于草地夜蛾Sf9细胞，用于表达外源基因的质粒来源于PUC系列，其含有一个多克隆位点和多角体蛋白启动子。
杆状病毒系统的主要有点包括
1，组蛋白具有完整的生物学功能，如蛋白的正确折叠、二硫键的搭配
2，蛋白翻译后的加工修饰；
3，表达水平高，可达总蛋白量的50%；
4，可容纳大分子的插入片段；
5，能同时表达多个基因。主要缺点是外源蛋白表达处于极晚期病毒启动子的调控之下，这时由于病毒感染，细胞开始死亡。
答：1、噬菌体载体：主要有双链噬菌体和单链丝状噬菌体两大类。双链噬菌体为λ类噬菌体，单链丝状噬菌体有M13、f1、fd噬菌体。2、杆状病毒载体：杆状病毒表达体系全部使用存在于高等真核细胞内的蛋白质修饰、加工和转运体系，属于真核表达体系。不需任何辅助因素即可适宜悬浮生长的昆虫细胞内大量增殖，因此...
答：杆状病毒是近年来被广泛用于高效表达外源蛋白的载体系统，本文就杆状病毒表达系统的生物学特性、转染载体、重组病毒的筛选、基因表达调控及其发展应用等方面作一概述。
答：一、表达载体不同：原核表达载体构建重组表达载体：1、载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体，具有对方面的...
答：要不就是洗的时候没洗干净？最后的时候好好洗洗，有但是强度强不强啊？
答：有的表达系统中还包括了协助载体进入宿主的辅助成分。比如昆虫-杆状病毒表达体系中的杆状病毒。 编辑本段蛋白表达系统分类及优劣分析 原核蛋白表达系统既是最常用的表达系统,也是最经济实惠的蛋白表达系统。原核蛋白表达系统以大肠杆菌表达系统为代表,具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点,...
答：本底蛋白表达较低，便于提取高纯度质粒。一般常用于质粒的构建、扩增，较少用于蛋白表达。DH10 Bac是一种比较特殊的感受态细胞，在昆虫-杆状病毒真核表达系统专门用于生产重组杆状病毒。细胞内含有Bacmid和辅助质粒。连有目的基因的pfastBac系列载体转入细胞后，会在helper的帮助下与Bacmid发生重组，产生重组杆状...
答：M13mp18/19也可以包装成噬菌体制作单链DNA模板用于DNA测序，是PCR技术建立之前的主要测序手段，Sanger用此材料建立的测序方法获诺贝尔奖。四、昆虫杆状病毒表达载体 昆虫杆状病毒表达载体是全世界范围内各实验室广泛使用另一种真核表达载体。昆虫杆状病毒是最大的环状单一双链DNA 病毒,其基因组在90～230 kb...
答：若用融合型转移载体则不必带上；⑥转移载体中已含有多聚腺苷酸加尾信号，外源基因无需再带上这类信号；⑦如果表达产物的信号肽不能被杆状病毒表达体系有效去除时，可考虑去除这类信号肽；⑧若表达产物不能稳定表达时，可对其N端进行改造或表达融合蛋白。除此以外，细胞的种类和生理状态也是重组病毒繁殖的...
答：4、在载体上一般含有增强基因转录的promoter，不同系统中采用的promoter完全不同2，将克隆导入表达细胞中。5、在大肠杆菌，酵母和哺乳动物细胞中，构建的外源质粒直接导入细胞即可，这个过程称为转化或转染。6、对于昆虫表达系统，构建的质粒还需要先转座成为杆状病毒基因组才能用于转染。7、基因过表达的应用...
答：在载体上一般含有增强基因转录的promoter,不同系统中采用的promoter完全不同。 2,将克隆导入表达细胞中。在大肠杆菌,酵母和哺乳动物细胞中,构建的外源质粒直接导入细胞即可,这个过程称为转化或转染。对于昆虫表达系统,构建的质粒还需要先转座成为杆状病毒基因组才能用于转染。 基因过表达的应用:大肠杆菌表达系统,酵母表达...
