培养流感病毒的方法有哪几种？
流感病毒有哪些分型？
1 用于培养流感病毒的细胞11 细胞株的选择 在最初培养流感病毒的时候用鸡胚,但鸡胚分离流感病毒容易引起病毒便变异和过敏性反应,还存在大规模生产时外源病毒的污染问题。而运用Vero和MDCK细胞培养流感病毒不但解决了上述问题,还使得病毒的免疫原更稳定。戚凤春[1]等人研究发现,相同的实验条件下,在MDCK细胞上培养的病毒HA滴度明显高于Vero细胞,因此我们培养流感病毒细胞株的选择MDCK细胞,其代数最好小于35代,细胞过老会使病毒不容易负载。 12 细胞最佳负载病毒的胞龄 MDCK细胞繁殖非常旺盛,必需只能提前一天将细胞培养瓶里的细胞接种在六孔板中,如果负载病毒用胞龄为两天的MDCK细胞,那么病毒培养的阳性率几乎为0,而胞龄为12-24h的MDCK细胞对病毒的负载阳性率区别不大[2]。13 细胞负载病毒的最佳密度 首先,MDCK细胞的密度不能太稀,这种细胞密度太稀则不能生长,也不能让细胞密得堆积起来,那样也会很大程度降 低病毒接种的阳性率。最好使细胞刚刚铺满孔,这时负载病毒后收获病毒的HA滴度最高。当工作人员提前一天将细胞接种在6孔板中时,应考虑细胞的生长速度,使其第二天负载病毒时的细胞密度适当。其次,MDCK细胞接种六孔板时要密度均匀,容易出现的情况是细胞都聚集在孔的边缘,而中间密度过稀,这样也会影响病毒负载的阳性率。避免这种情况出现就要工作人员手法熟练,如果出现了这种情况,将培养板轻轻晃动(避免液体溅出),能有效改善细胞的分布。2 培养流感病毒的试剂 用于培养流感病毒试剂的不同也会很大程度影响病毒培养 阳性率。首先,不使用过期的试剂;其次,最好使用知名厂家的试剂,比如GIBCO等;再次,使用前将试剂从冰箱拿出一段时间,最好等试剂的温度已经平衡到室温再用。如果是给细胞换代,过冷的试剂会影响细胞的生长状态;如果是负载病毒前洗细胞用,过冷的试剂会使细胞突然皱缩而病毒培养的阳性率。3 样品 31 样品的存放 样品存放的时间直接影响病毒负载的阳性率,标本越新鲜,病毒培养的阳性率越高。如果样品不能及时负载细胞,应将样品放在-70!冰箱中,避免反复冻融,冻融次数越多,病毒培养的阳性率越低。注意不能将样品放在-20!的冰箱中,流感病毒在-20!非常不稳定,如果当天的样本要第二天才能接种,应将样品放在4!冰箱中。32 样品的无菌处理 因为样品的采样条件不可能无菌,虽然采样液中有抗生素,也不能保证细菌全被杀死,所以阳性样本最好过滤到无菌的15ml离心管中备用。有些工作人员采用往细胞培养板中加抗生素避免污染,这样虽然省事,但会对细胞有伤害,从而降低了病毒培养的阳性率。4 病毒负载的操作步骤41 细胞洗涤 将六孔板中的细胞培养液倒去,用HBSS洗涤每一孔三遍以上,其作用是洗去残留的FBS,FBS通过抑制胰酶而抑制流感病毒的复制。将洗液倒去后,应立即加入洗液或病毒液,过长时间将细胞暴露在空气中将很大程度降低病毒培养的阳性率,最好将细胞暴露在空气中的时间缩短在5秒以内。42 病毒液的接种量 病毒液的接种很有讲究。负载在细胞上的病毒液应大于300u,l否则不够盖过整孔细胞。待37!孵育1~2h后,不管开始负载了多少体积的病毒液,都应在每孔留300ul病毒液再加入病毒培养基,若病毒液全都弃去或留得太少,会使病毒培养阳性率大打折扣;若病毒液留得太多,比如超过400u,l也会使阳性率降低很多,因为存留过多的缺损病毒会严重影响正常病毒的复制。43 病毒液的孵育时间 理论上,病毒液在37!孵育1~2h都可以,但我们发现1h还是太短,最好在1h15min加入病毒培养基,不要时间过长,那样也会使病毒培养的阳性率降低,可能是因为采样液的pH值和病毒培养基不同,孵育时间稍长导致细胞受到损伤。而盲传的时候,孵育的时间可以到2h以上,因为这时候所用的病毒液也是病毒培养基,而不是采样液。44 病毒培养基的配制 病毒培养基是用DMEM加入HEPES和胰酶配制而成的,HEPES的作用是加强体系的缓冲能力,胰酶的作用是将病毒粒非裂解型的HA0变成裂解型的HA1+HA2,从而提高流感病毒在细胞中的复制能力,因为流感病毒只有血凝素(H)是裂解型的才具有感染性。但是HEPES和胰酶在DMEM在4!共存时间过长会引起pH值上升,所以病毒培养基我们一般都是现配现用。 45 病毒HA滴度的测定 CPE出现时间随病毒的型别和毒株的差异以及感染量的大 小而异。我们将标本接种后3d观察是否出现CPE,出现CPE的测定HA滴度,滴度大于8则收获病毒,用HI实验测定病毒亚型,病毒滴度小于8进行盲传,再在第3d测定HA滴度。若负载病毒7d还不出现CPE,维持液中又查不出HA活性,可认为阴性标本,弃之。3d时间出现病毒滴度的 最高峰, 4d和2d都低于3d时病毒的滴度。收获毒株前,将 细胞于-80!/37!冻融一次,有利于增加病毒的HA滴度。
鸡胚传代培养、MDCK细胞培养、本动物回归培养。主要有细胞培养、组织培养和动物试验。
答：病毒检测方法有：（1）病毒（鸡胚、细胞）分离培养与鉴定，用途为直接分离病毒；（2）免疫荧光法，用途为检测组织、细胞培养物中病毒抗原；（3）免疫酶法（包括免疫酶组织化学染色法和免疫过氧化物酶细胞单层试验），用途为检测组织、细胞培养物中病毒抗原；（4）中和试验，用已知阳性血清检测病毒，金标准...
答：吸附，侵入，脱壳，大量快速复制病毒核酸，生物合成，装配与释放等5个步骤，生物课本不是有吗？老师都有讲过的，我们平常吃的快克感冒药里就有抗病毒的成分。
答：1、基于real-time RT-PCR的方法检测新的甲型H1N1流感病毒(引物和探针序列为美国CDC设计):4月29日WHO网站上公布了美国CDC设计的针对此次甲型H1N1流感病毒的real-time RT-PCR引物和探针,此实验用于检测疑似甲型H1N1流感病例的呼吸道样本, 因此,用此real-time RT-PCR的方法,建议首先筛选甲型流感病毒并排除季节性流感病...
答：10、有何预防措施？流感病毒主要通过空气和接触传播，因此咳嗽或者打喷嚏时应该掩住口、鼻；应勤洗手，还可经常用酒精为日常用品消毒。此外，少在人多的地方“扎堆儿”也是降低感染概率的一个有效方法。一旦发现染病，患者应尽量避免外出，以防将病毒传染他人 ...
答：甲型流感病毒通常用鸡胚来分离和培养,一般能在鸡胚羊膜腔和尿囊腔中生长。除鸡胚外,常用于病毒分离的有原代人和猴肾细胞,常用于病毒培养的有传代牛和狗肾细胞。但生长和引起病变程度,不同病毒株间有差别。最适生长温度为33～35℃。 人甲型流感病毒可引起人的流感,并有时引起肺炎和其他并发症,主要是气管和支气管纤...
答：主要有血凝试验、血凝抑制试验、琼脂扩散试验、神经氨酸酶抑制试验、酶联免疫吸附试验、病毒中和试验及免疫荧光试验等。其中血凝和血凝抑制试验、琼脂免疫扩散试验是OIE推荐使用的方法。
答：1、找到宿主细胞，并将自己的RNA（流感病毒是RNA病毒）导入宿主细胞。2、RNA在宿主细胞中进行逆转录，变成DNA。3、利用DNA在宿主细胞内合成一系列病毒自身所需物质（原材料都是从宿主细胞中偷的），并进行组装。4、待病毒组装好了以后，再释放到体外。结束...希望以上回答对你有帮助 不懂，欢迎再问。
答：3. 链球菌性咽炎 该病咽部红肿,扁桃体肿大,有脓性分泌物,颌下淋巴结肿大,WBC 中性粒细胞增高,血培养( )。 4. 其它病毒性呼吸道感染 如副流感病毒、腺病毒感染 要通过病原学检查来区别。 5. 支原体肺炎 也要通过病原学检查来区别。 [治疗] (一) 一般对症治疗 卧床休息,多饮水,适宜营养,补充维生素,保持...
答：对于我们人体来说，我们日常吃的是非受精卵，整个鸡蛋的营养物质基本都能够被吸收，不会浪费。所以，对于人体来说，鸡蛋是营养很好的食物。减肥健身人群，需要补充营养的人群，都可以选择鸡蛋来食用。而制作疫苗的过程，需要流感病毒在一个封闭的培养皿里充分发育复制，待其成熟之后，再将其提炼出来，再分离...
答：4。病毒分离:从患者呼吸道标本中(咽拭子、口腔含漱液、鼻咽或气管吸出物、痰或肺组织)分离猪流感病毒。常用的方法有鸡胚接种法和细胞培养法。现有的诊断方法中,病毒分离法是较敏感的,但需要2-3周时间。 (五)胸部影像学。 合并肺炎时肺内可见片状影像。严重病例片状影像范围广泛。 四、诊断 人感染猪流感的诊断主...
