用自己合成的引物送到测序公司进行细菌基因组测序
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-08-04
合成引物和测序引物
但是，一般测序公司测4kb的片段还是很容易的，因为只要拿到了第一个700bp，就可以在这个基础上再设计引物，进行下一段的测序工作。
可是，我想说的是，你扩不到片段是什么意思？是扩不出任何片段还是扩不出4kb的片段？你提的基因组有没有问题？引物有没有问题？
最后，找个华大或者英骏这样大一点的公司，建议提供菌液给他们。
序列太长了，需要测序公司给你在设计引物测。费用就比较贵了。基因组测序需要做二代测序，费用应该不便宜，也没必要。现在一代测序测不了。除非你自己把PCR扩出来测，任务量巨大，呵呵。
序列太长了吧，测序的可信区间只有800b左右，我的测序测到900多之后就全是杂峰了
测序引物选择
答：因为在引物下游几十个bp左右，测序的结果是不稳定的，往往测不出，需要几十个bp之后才稳定。你再看看你送的是质粒还是pcr产物，如果是质粒，就可以看看外源片段的上游有什么启动子或者通用的测序序列，一般的测序公司都是有自己设计的较好的通用测序引物，你可以用他们的（不用加钱）。你参考下这个文章...
T载上连接2000bp的目的片段,请问怎么测序,谢谢!!
答：但是对应的两个末端的结果不太可靠，所以需要人为的选择、拼接一下，当然一些测序公司会根据测序的情况自动给你拼接好。如果不放心，可以直接选择“测通”，公司会在已经测出稳定结果的地方帮你再合成一条引物继续往前测，直到测到载体序列为止。2K的带，选双向测序，自己拼接一下就可以了。
...百分之九十多都是载体序列另外还能找到自己的引物是怎么回事啊_百度...
答：说实话，克隆时偶尔会出现一些难以理解的事情，我还遇到过引物序列不停重复然后插入到了载体上，遇到过只插入部分目的序列，还遇到过PCR出来有条带，测出来是空载。经验丰富的实验师也好，有名的大教授也好，也不知道这只偶然现象为什么会发生。
想检测自己P53基因有没有缺失和突变是不是要做全基因测序,如果只查多态...
答：只查P53是否缺失的话，只要用pcr检测就好了。如果你在实验室里的话，只要自己设计一对引物，取点口腔上皮细胞（用棉签刮一下），做个pcr，跑个胶，自己看一下就可以了。还要看是否突变的话，就要把整个基因扩增出来，送测序公司测序，然后blast一下。如果你不懂的话，当然最好是建议你找专门的机构...
酵母菌是不是可以直接测序,不用提质粒
答：你们是自己测序，还是送公司测序？如果是送公司的话，可以直接测序，测序引物为M13通用引物。但是测序之前需要把挑出来的克隆，扩繁、PCR检测后再测序。测序公司再提取质粒-测序。如果是自己测序，酶切应该是检测用，阳性的质粒再测序。总之，一般情况下，测序都是用质粒。酶切或者PCR只是用来检测阳性克隆，...
微生物中存在一个有价值的基因怎么把它提取出来?
答：再根据这个微生物基因组中这段基因上下游序列设计引物，用提取的gDNA作为模板进行PCR，顺利的话就可以扩增出来，最后将扩增产物跑电泳回收，送到测序公司测序，以确定是不是跟NCBI上一样的序列。这样就完成了基因的获取工作了。如果这个微生物的全基因组没有被测过的话，那你可以选择全基因组测序得到完成...
自己设计的基因导入到载体后,扩增完成,用PCR检测和双酶切检测成功,但是...
答：PCR检测和酶切检测成功的话，说明你确实插入东西了，你确定你这两种检测用的引物和酶都没问题吗？测序结果你是用正向引物测序的还是用的反向引物测序的，如果是反向引物的话，测序结果需要reverse complement以后再跟原始序列进行比较
测序的引物该怎么选择
答：如果你是质粒上通测的话，测序公司会用通用的引物。如果只是测片段的话，测序公司也会给合成引物的啊。
设计克隆一个基因的CDNA序列的实验!注意是实验哦!周四之前!谢谢,满意...
答：2，查阅一些文献，看要克隆的该基因在哪种组织里面表达量高。然后提取该组织或部位的RNA，反转录成CDNA。以CDNA作为模板进行PCR。3，跑电泳，若有单一且大小接近的条带，切胶回收。4，连接入质粒载体，送测序公司或自己测序，与近缘种内该基因比对后，便可确定该物种的该基因序列。
表达载体测序的时候为什么需要引物呢。
答：测序其实也是PCR反应，当然需要引物了，不过很多载体是公用的，测序公司有很多用于载体上测序的引物，你可以先打电话问一下测序公司有没有你要测的那个载体的引物，没有的话就自己提供或者让他们合成
在高中教材上的PCR技术中就需要合成引物。而合成引物之前，当然需要测序引物。然后在化学合成什么的。测序引物分自带引物和通用引物，自带引物是自己设计的PCR上的某段序列或者是基因工程的载体上的某段序列、通用引物就是购买载体（简单点说就是用买来做实验的载体准备的几段附赠的测序引物。）测序必须为特异性引物，不能为随机、兼并、不纯、带荧光标记、长度过长引物。尤其是基因工程的引物。更加严格。长度要控制在15-30之间、而PCR的要求比较低，因为PCR仅仅是为了扩充已知序列、
测序一般一个反应在700bp左右，也就是说一个引物可以支持700bp长度的片段的测序工作，你自己设计的一对引物就是正反两方向测，大概在1400bp。但是，一般测序公司测4kb的片段还是很容易的，因为只要拿到了第一个700bp，就可以在这个基础上再设计引物，进行下一段的测序工作。
可是，我想说的是，你扩不到片段是什么意思？是扩不出任何片段还是扩不出4kb的片段？你提的基因组有没有问题？引物有没有问题？
最后，找个华大或者英骏这样大一点的公司，建议提供菌液给他们。
序列太长了，需要测序公司给你在设计引物测。费用就比较贵了。基因组测序需要做二代测序，费用应该不便宜，也没必要。现在一代测序测不了。除非你自己把PCR扩出来测，任务量巨大，呵呵。
序列太长了吧，测序的可信区间只有800b左右，我的测序测到900多之后就全是杂峰了
答：因为在引物下游几十个bp左右，测序的结果是不稳定的，往往测不出，需要几十个bp之后才稳定。你再看看你送的是质粒还是pcr产物，如果是质粒，就可以看看外源片段的上游有什么启动子或者通用的测序序列，一般的测序公司都是有自己设计的较好的通用测序引物，你可以用他们的（不用加钱）。你参考下这个文章...
答：但是对应的两个末端的结果不太可靠，所以需要人为的选择、拼接一下，当然一些测序公司会根据测序的情况自动给你拼接好。如果不放心，可以直接选择“测通”，公司会在已经测出稳定结果的地方帮你再合成一条引物继续往前测，直到测到载体序列为止。2K的带，选双向测序，自己拼接一下就可以了。
答：说实话，克隆时偶尔会出现一些难以理解的事情，我还遇到过引物序列不停重复然后插入到了载体上，遇到过只插入部分目的序列，还遇到过PCR出来有条带，测出来是空载。经验丰富的实验师也好，有名的大教授也好，也不知道这只偶然现象为什么会发生。
答：只查P53是否缺失的话，只要用pcr检测就好了。如果你在实验室里的话，只要自己设计一对引物，取点口腔上皮细胞（用棉签刮一下），做个pcr，跑个胶，自己看一下就可以了。还要看是否突变的话，就要把整个基因扩增出来，送测序公司测序，然后blast一下。如果你不懂的话，当然最好是建议你找专门的机构...
答：你们是自己测序，还是送公司测序？如果是送公司的话，可以直接测序，测序引物为M13通用引物。但是测序之前需要把挑出来的克隆，扩繁、PCR检测后再测序。测序公司再提取质粒-测序。如果是自己测序，酶切应该是检测用，阳性的质粒再测序。总之，一般情况下，测序都是用质粒。酶切或者PCR只是用来检测阳性克隆，...
答：再根据这个微生物基因组中这段基因上下游序列设计引物，用提取的gDNA作为模板进行PCR，顺利的话就可以扩增出来，最后将扩增产物跑电泳回收，送到测序公司测序，以确定是不是跟NCBI上一样的序列。这样就完成了基因的获取工作了。如果这个微生物的全基因组没有被测过的话，那你可以选择全基因组测序得到完成...
答：PCR检测和酶切检测成功的话，说明你确实插入东西了，你确定你这两种检测用的引物和酶都没问题吗？测序结果你是用正向引物测序的还是用的反向引物测序的，如果是反向引物的话，测序结果需要reverse complement以后再跟原始序列进行比较
答：如果你是质粒上通测的话，测序公司会用通用的引物。如果只是测片段的话，测序公司也会给合成引物的啊。
答：2，查阅一些文献，看要克隆的该基因在哪种组织里面表达量高。然后提取该组织或部位的RNA，反转录成CDNA。以CDNA作为模板进行PCR。3，跑电泳，若有单一且大小接近的条带，切胶回收。4，连接入质粒载体，送测序公司或自己测序，与近缘种内该基因比对后，便可确定该物种的该基因序列。
答：测序其实也是PCR反应，当然需要引物了，不过很多载体是公用的，测序公司有很多用于载体上测序的引物，你可以先打电话问一下测序公司有没有你要测的那个载体的引物，没有的话就自己提供或者让他们合成
