您好~我想知道你用无血清培养基培养细胞后,最终选择了什么方法终止胰蛋白酶消化?结果怎么样呢?等回复。

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-06-29
用胰蛋白酶消化细胞后,需要用血清中和。具体这种中和作用所要求的胰蛋白酶和血清之间的比例是多少?

博凌科为生物科技-为你解答:做了很久的试验,真的没有想过胰酶和血清的对应关系。不过细想下来,这个应该也没有固定的比值。血清的品种都是不同的,成分必然有差异,如何能确定其与胰酶的比值关系?我们消化细胞的时候,如果是传代,细胞 变形后,吸出胰酶直接加入适量的hanks液或者全培,这个量看自己的喜好和吹打细胞方便而定。一般都可以中止消化的。不会存在继续消化的事情。如果是从 组织上消化细胞做原代培养,我一般都使用全培进行中止,而且加的很多,0.25%的胰酶,用10%血清,按1:2的比例应该是足够的。当然全培是2,一般我养细胞的时候,会用国产的比较便宜的血清配制全培,专门用于中止消化,这样有几个好处:一是中止消化的效果应该好于hanks液吧,再是也有利于维 持细胞活性。而且这部分液体会被离心去掉,血清便宜,离心掉了不会心疼。而养细胞的时候用好血清。个人观点,仅供参考。

1:血清中含有的Ca,Mg离子可以抑制胰酶活性
2:血清中的一些蛋白因子抑制胰酶活性

最常用的就是使用胰蛋白酶抑制剂了,sigma公司就有(货号:T6522),按照产品说明配制和使用即可。
如果你培养的细胞对温度变化不敏感的话,也可以使用刚从四度冰箱拿出来的培养基终止,立即离心即可。
这两种方法都是有效的,而且不会对细胞生长产生明显的影响。

你好,一种是用单独配置的血清培养基,另一种就是用细胞培养液上清,旧的培养液里细胞本身会分泌很多蛋白因子,可以抑制酶活。你可以试试,再测测细胞存活率。

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    答:细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程,一般要逐步降低血清浓度,直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。我们实验室用的是从北京裕恒丰买的ScienCell无血清培养基,是经灭菌的液体培养基,包含必需和非必需...
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  • 我的细胞培养不用血清,冻存要怎么样
    答:细胞培养不用血清,冻存可以用无血清冻存液 配方为细胞条件无血清培养基与含10%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基1比1混匀 冻存过程:消化贴壁细胞或收集悬浮细胞,将细胞悬液收集至离心管并1000rpm离心10分钟,弃上清液 用一定量冻存液将细胞重悬,计数并调整细胞密度至100个每毫升左右 将细胞悬液分装...
  • 用无血清培养基稀释后的探针放在4℃吗?
    答:是的。用无血清培养基稀释后的探针放在4°C下是最合适的温度,至少可以保存3个月,无污染,很安全。
  • 我的细胞培养不用血清,冻存要怎么样
    答:细胞培养不用血清,冻存可以用无血清冻存液 配方为细胞条件无血清培养基与含10%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基1比1混匀 冻存过程:消化贴壁细胞或收集悬浮细胞,将细胞悬液收集至离心管并1000rpm离心10分钟,弃上清液 用一定量冻存液将细胞重悬,计数并调整细胞密度至100个每毫升左右 将细胞悬液分装...
  • 无血清培养基的X-VIVO培养基
    答:产品:04-380Q X-VIVO 10 with Gentamicin and Phenol Red, 1 L04-743Q X-VIVO 10 w/o Gentamicin and Phenol Red, 1 L产品简介:为了有助于在无血清环境中制备淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)而设计的。 产品:04-418Q X-VIVO 15 with Gentamicin and Phenol Red, 1 L04-744Q X-VIVO 15 ...
  • 细胞培养培养基中有无血清有什么区别
    答:不加血清的培养基就是加了酚红的缓冲液,所包含的营养和能量很少,而血清中包含来着动物体内,可以用的多种蛋白,氨基酸,脂质,无机离子,维他命等营养成分,这样细胞才能在更加贴近体内环境条件生长!而且长得更好!
  • 胰岛素在配置无血清培养基中具体使用多少量?
    答:我们都知道, 胰岛素在体内最主要的功能是调节机体血糖水平。 其实胰岛素的作用非常广泛, 包括调节蛋白质和脂肪的代谢, 以及促进细胞生长等。胰岛素来源途径广泛,有提取的,也有重组的,重组的又分为药用级别和试剂级别,在配制用于体外细胞培养的无血清培养基最好使用不含任何辅料的试剂级别胰岛素,以避免...