细胞核核膜如何提取 包括过程方法设备

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-06-28
细胞核提取有没有什么经典方法

细胞比较简单,只有细胞膜,抽提过程中,很容易破坏细胞膜,从而得到蛋白,相应蛋白中受到其他物质干扰也比较少,样品较为干净。
但是用组织的时候,组织由细胞组成,但是从组织中抽提丹巴就要复杂,做组织匀浆以后,再分离组织碎片和蛋白,但是分离过程可能没有那么好,组织中含有的各种杂质,杂蛋白就比细胞中要多,要复杂。因此选择适当的方法提取组织蛋白,对于后续的Western来说还是非常重要的,这也是为什么细胞的蛋白做WB挺好,但是换到组织,可能有些条件就需要进一步优化了。

如何提取细胞核蛋白
,比如分离核组分,常用NP40,因为其对核膜的破坏作用更小;
2,分离mitochondria组分,可以使用digitonin,因为线粒体外膜非常脆弱,极容易在分离时破裂,导致内外膜间许多成分释放出来;

调整溶液中离子浓度,先破碎细胞膜,梯度离心,获得核
再改变离子浓度,破碎核膜,离心,具体的离心力和过程你可以参考相应的文献,比较成熟,我们过去经常做。

先把细胞破碎,梯度离心,分离核与细胞器等
得到细胞核,在超速离心,应该可以获得比较纯的核膜吧。。