细菌的革兰氏染色实验哪些环节会影响染色反应结果的正确性
一、影响因素
1、在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果，假阳性主要是由于脱色不完全，可能是由于涂片过厚，或者是结晶紫染色过度，导致脱色不完全。
2、假阴性可能是因为细胞固定过度，造成细胞壁通透性的改变，而出现假阴性结果；另外，细胞培养时间太长，可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶，也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果。
二、拓展资料：关于革兰氏染色（资料来源：网页链接）
1、革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法。
2、革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰（Hans Christian Gram，1853年－1938年）于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。
保证革兰氏染色实验结果可靠的方法：
革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。
染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。
选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。
脱色时间不要过长。革兰氏染色步骤： （1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。 （2）晾干：与简单染色法相同。 （3）固定，与简单染色法相同 （4）结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟。 （5）水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。 （6）媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染1min。（7）水洗：用水洗去碘液。 （8）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色，立即水洗。 （9）复染：滴加蕃红复染5min。 （10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。 （11）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干。 （12）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。（13）实验完毕后的处理： ①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。
2、还有其他环节：制片时菌膜的厚度和细菌量是否太多、脱色时间是否适宜、稀释石炭酸复红的浓度及是否已有沉淀、加热固定时是否加热过度等。
3、革兰氏染色法原理：G+、G-细菌的细胞壁成分和结构不同。G+的CW主要有肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程中，当用95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，CW通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在CW内而不易脱色，因此呈蓝紫色。G-的CW中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，CW的通透性增加，使结晶紫-碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂的颜色，因此呈现红色。
很多，包括制片时菌膜的厚度和细菌量是否太多、脱色时间是否适宜、稀释石炭酸复红的浓度及是否已有沉淀、加热固定时是否加热过度等......
最主要的是 酒精脱色
答：学生在进行格兰仕染色的时候出错的主要原因第一个就是染色的时间太短，第二个就是拖车的时间太长，这样的话就可以使染色不均匀。
答：革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立 细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。为观察方便，脱色后再用...
答：实验二 土壤中微生物分离纯化培养实验三 菌种保藏实验四 细菌形态观察及单染色实验五 放线菌及霉菌形态观察实验六 革兰氏染色及芽孢染色实验七 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定实验八 微生物直接计数法及测微技术实验九 大肠杆菌生长曲线的测定实验十 水中细菌总数的测定实验十一细菌细胞的生化反应实验实验十二噬菌体...
答：镜下革兰氏染色结果,各类平板上生长情况,病人的基本资料,诊断,本标来源等基本信息分析评述给学生听,逐步推论出细菌的大致方向,正确引导学生的思路。学生在每天应对比较常见而且较有意义的细菌进行鉴定,做生化反应及药敏试验,通过四周自己动手操作,能对临床上常见的细菌有一定的认识,能把菌鉴定到种。通过实践提高学生的...
答：实验一 3学时1、显微镜使用 (放录相)2、油镜的使用及细菌形态观察3、环境中微生物检测 (由结果中分辨真,细,放,各类微生物菌落)实验报告:要求绘出细菌形态图实验二 3学时1、细菌运动性观察(电视)2、无菌操作演示(试管斜面接种)3、细菌简单染色与革兰氏染色实验报告;绘出细菌形态图并注明染色结果实验三 3学时1...
答：实验一：掌握显微镜的使用与细菌的形态观察，了解细菌的基本结构。实验二：通过革兰氏染色法，区分不同类型的细菌。实验三：学习细菌接种与培养技术，探究其生存环境和繁殖方式。实验四：研究细菌的分布，理解其在自然界中的角色。实验五：探讨外界因素对细菌生长和活动的影响。实验六：专门研究化脓性球菌，...
答：4.如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察,效果会更好。 六、思考题 1.镜检时,你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝? 2.你认为霉菌和放线菌菌丝的主要区别是什么? 实验六 革兰氏染色及芽孢染色 一、实验目的 1.了解革兰氏染色法和芽孢染色法的原理,并掌握其操作方法。 2.了解革兰氏染色法在细菌...
答：(置于玻片上,不作染色,压上盖玻片),在显微镜下检查可提供有用的信息.鳞状细胞的存在提示材料来源于喉部以上;真正从气道排出的痰液是以存在肺泡巨噬细胞为特征的.wright染色可显示嗜酸细胞的比例,嗜酸细胞提示过敏.中性粒细胞常在脓性痰中占优势,提示炎症,通常是感染过程.革兰氏染色可证实细菌的存在,并可作初步分类....
答：比如:“食品中常见菌类的平板培养”考察了无菌操作、培养基的制备,对食品中常见菌类平板接菌技术;“食品中常见菌类的形态观察”考察了革兰氏染色,各真菌形态辨别等。在进行具体考核过程中,可把每个考核的内容进行量化定出详细的评分标准,根据学生的每一个操作环节现场打分,并对同学进行现场提问,让学生进行答辩。 4 ...
答：1884年丹麦科学家革兰姆创造了一种复染法,就是先用结晶紫液加碘液染色,再用酒精脱色,然后用稀复红液染色。经过这样的处理,可以把细菌分成两大类,凡能染成紫色的,叫革兰氏阳性菌;凡被染成红色的,叫革兰氏阴性菌。这两类细菌在生活习性和细胞组成上有很大差别,医生常依据细菌的革兰氏染色来选用药物,诊治疾病。
