马铃薯M病毒病是怎样检验与检疫的？

鉴别寄主：
①苋色藜：接种叶片表现无症或产生褪绿斑，接种8～10d后，出现畸形和顶枯，系统叶坏死。
②昆诺藜：叶片无症或产生褪绿斑，强光照时出现花叶，而弱光照导致顶枯。
③曼陀罗：系统轻型褪绿。
④德伯纳烟：叶斑驳及系统坏死。
⑤菜豆品种Pinto，Prinoe：常用于区分PVT和其他线形马铃薯病毒，接种后遮阴，叶片出现严重坏死环斑，然后是系统性坏死，最后康复。
枯斑寄主：菜豆。
体外稳定性：
①钝化温度：65℃。
②稀释终点：10-5。
③体外存活期：2～4d。
血清学检测：具中等免疫原性，其抗血清难以制备，这是由于PVT的提纯产量低所致。但是通过多次纯化，并将病毒贮于液氮中可以弥补这一缺陷。ELISA也是有效的检测方法（Schroeder＆Weidermann，1990）。与苹果茎沟病毒血清学关系较近，与苹果褪绿叶斑病毒，马铃薯M病毒，马铃薯S病毒，马铃薯X病毒，马铃薯Y病毒等病毒均无血清学关系。
检疫危险性评价：本病的病原马铃薯T病毒，可由马铃薯种薯和曼陀罗、假酸浆等种子远距离传播，对马铃薯生产可构成相当经济损失，季良进行危险性评价时危险度值7分，为中危有害生物。国内尚未发生，应列入进境植物检疫潜在危险性有害生物名单。
地理分布：秘鲁和玻利维亚发现，但它可能广泛分布于安第斯地区。
检疫国家地区：阿根廷、保加利亚、俄罗斯、荷兰、罗马尼亚、美国、南斯拉夫、挪威、欧盟、欧洲和地中海植保组织、斯洛伐克、土耳其、印度尼西亚印度、巴西、智利、丹麦、以色列、西班牙、意大利、英国、希腊、阿尔及利亚、澳大利亚、冰岛、摩洛哥等。
应检植物：马铃薯种薯和曼陀罗、假酸浆种子。
检疫措施：因我国将马铃薯列为禁止进口植物，进口时须经国家质量监督检验检疫总局特许审批，限量进口，并要求附有出口国《检疫证书》，保证不带有此类病毒。入境后须经指定的隔离检疫站进行一年以上生育期检验，确认无病者，交还进口货主，并在隔离条件下繁殖无病毒种苗，才可允许用于生产种植。

鉴别寄主：
①辣椒：明脉、花叶、脉带。
②曼陀罗：无症侵染。
③苋色藜、昆诺藜：接种叶出现黄褐色小斑点，无系统症状。
④心叶烟：系统轻或重斑驳。
⑤洋酸浆：接种叶出现褐色坏死斑点，上部幼叶脉明，病叶脱落。
⑥马铃薯（A-6）；接种叶出现褐色局部病斑，以后出现坏死型系统症状。
⑦烟草cv.Samsun：普通株系第15～20d出现明脉，后发展为斑驳；“C”株系（stripple-streak）第15～20d出现轻花叶和斑驳；坏死株系在第10～12d表现叶脉和茎坏死，叶片向后卷缩，发育不良，最后病株死亡。
枯斑寄主：苋色藜、昆诺藜、枸杞、烟草品种（McNair12、NC95）。
体外稳定性：
①钝化温度：50～55℃（中国马铃薯分离物），55～65℃（中国烟草分离物），50～55℃（中国台湾分离物），50～60℃（印度分离物），52～62℃（日本分离物），56～60℃（俄罗斯分离物）。
②稀释终点：10-3（中国马铃薯分离物），10-1～10-3（中国烟草分离物），10-1～10-2（中国台湾分离物），1/100～1/1000（印度分离物），10-3～0-4（日本分离物），10-4～0-5（俄罗斯分离物）。
③体外存活期：3～4d（中国马铃薯分离物），2～4d（中国烟草分离物），3d（8℃中国台湾分离物），48h（印度分离物），1～2d（普通株系）或50d（坏死株系）（日本分离物）1～2d（俄罗斯分离物）
血清学检测：强免疫原性。提纯液加Freund’s不完全佐剂乳化后注射家兔，沉淀效价1/512～1/4096。ELISA能检测病毒含量极低的病株（Gugerli&Gehringer，1980）。病毒经pH10.5盐酸氨基乙醇ethanolamine-hydrochloride（Purcifull&Gooding，1970）或SDS（Purcifull&Batchelor，1977），降解，以降解物为抗原，可进行琼脂糖免疫扩散反应，但只能使用相应的抗降解物的抗血清，扩散法可检测粗病汁中的病毒和确定病毒间的血清关系。
抗血清微量沉淀试验效价1/640，与马铃薯X病毒、马铃薯S病毒、马铃薯M病毒均无反应。与马铃薯Y病毒为阳性反应。建立了分泌马铃薯Y病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。血清学关系与烟草蚀纹病毒、天仙子花叶病毒、马铃薯A病毒、辣椒脉斑驳病毒、鬼针草斑驳病毒等病毒有远缘关系。
近年来，我国陆续报道了用ELISA、DAS-ELISA、DOT-ELISA和DTBA检测马铃薯Y病毒（张国柱，1991；孟清等，1993；刘卫平，1997；白艳菊等2000；朱国春等，2000），并已有效应用于筛选大量样品。
分子生物学检测：1995年魏梅生等试验成功用生物素标记cDNA探针检马铃薯Y病毒；1999年李浩戈等报道的RT-PCR，扩增物为780bp检测PVY；袁青等（2005）报道用二重RT-PCR快速检测法，能从马铃薯块茎，茎秆，叶柄和叶中，同时检PVY等4种病毒，因采用简单RNA浸取法和优化二重RT-PCR技术，按设计480bp（马铃薯Y病毒）等4种专化引物，使检测更简单和快速。
电镜观察：病毒存在表皮细胞的细胞质及细胞液泡。在表皮细胞质内有风轮状内含体。
检疫危险性评价：本病的病原马铃薯Y病毒，可由马铃薯种薯远距离传播，和蚜虫非持久性传毒，对马铃薯生产可构成严重经济损失，季良进行危险性评价时危险度值10分，为高危有害生物。国内虽已普遍发生，但有很多株系国内尚未发生，应列入进境植物检疫潜在危险性有害生物名单。同时应列为国内防治重点。
地理分布：世界性分布，YO strains分布全世界，YN strains发生在欧洲（包括前苏联的欧洲部分）、非洲一部分和南美，YC strains（包括Potato virus C）可能分布在澳大利亚、印度、英国的一些地区、欧洲大陆以及温带生产马铃薯、和在大田生产辣椒、烟和番茄的国家。
检疫国家地区：阿尔巴尼亚、保加利亚、冰岛、美国、南斯拉夫、欧盟、斯洛伐克、匈牙利、印度尼西亚、巴西、印度、土耳其、阿根廷、智利、丹麦、西班牙、意大利、英国、希腊、以色列、阿尔及利亚、澳大利亚、摩洛哥等。
应检植物：马铃薯种薯。
检疫措施：因我国将马铃薯列为禁止进口植物，进口时须经国家质量监督检验检疫总局特许审批，限量进口，并要求附有出口国《检疫证书》，保证不带有此类病毒。入境后须经指定的隔离检疫站进行一年以上生育期检验，确认无病者，交还进口货主，并在隔离条件下繁殖无病毒种苗，才可允许用于生产种植。

鉴别寄主：

①白花曼陀罗：接种叶片发生褪绿或坏死的局斑。系统感病的叶片出现皱缩和褪绿的斑点。先脱落下部叶片，继而脱落上部叶片。植株矮缩，且常死亡。

②千日红：欧洲大陆的某些分离物使叶片发生中央黄绿外圈带红的局斑。

③番茄：系统感染，但无症状。

④德伯纳烟草：不规则的褐色坏死环斑。不系统感染。

⑤刺萼龙葵：茎、叶柄和叶脉出现褪绿条点，系统感染。

枯斑寄主：白花曼陀罗，千日红，土荆芥，昆诺藜，菜豆cv.Red Kidney。

体外稳定性：

①钝化温度：65～70℃（日本分离物），65～71℃（俄罗斯分离物）。

②稀释终点：10-3～10-4（日本分离物），10-2～10-3（俄罗斯分离物）。

③体外存活期：数日（20℃）（日本分离物），2d（20℃）（俄罗斯分离物）。

血清学检测：病毒的免疫性良好，试管沉淀的沉淀呈鞭毛状。血清试验是诊断马铃薯该病毒的好方法。用于诊断马铃薯感染的试验方法有下列几种：微量沉淀试验法，玻片沉淀试验，皂土絮状试验法和ELISA；白艳菊等（2000）报道用DAS-ELISA法，同时检测PVM等5种马铃薯病毒；朱国春等（2000）用DTBA法检测马铃薯新鲜病组织（不能检冷冻样）的PVM，比常规ELISA法更准确，简单，成本低，无需特殊仪器，缺点是不能定量。要测定与马铃薯S病毒混杂的马铃薯M病毒。可使用经过马铃薯S病毒吸收的马铃薯M病毒的抗血清，可用琼脂双扩散试验，但抗原的浓度必须高。

马铃薯M病毒与香石竹潜隐病毒、马铃薯S病毒、菊B病毒、西番莲潜隐病毒，仙人掌病毒2号和红三叶草脉花叶病毒等，香石竹潜隐病毒属病毒的血清学关系较为疏远。

检疫危险性评价：本病的病原马铃薯M病毒，可由马铃薯种薯远距离传播，和蚜虫非持久性传毒，对马铃薯生产可构成相当经济损失，季良进行危险性评价时危险度值8分，为中危有害生物。国内尚未发生，应列入进境植物检疫潜在危险性有害生物名单。

地理分布：韩国、俄罗斯远东、日本等马铃薯产区。

检疫国家地区：阿根廷、保加利亚、南斯拉夫、欧盟、斯洛伐克、匈牙利、澳大利亚、印度尼西亚、阿尔及利亚、冰岛、摩洛哥、斯洛伐克等。

应检植物：马铃薯种薯。

检疫措施：因我国将马铃薯列为禁止进口植物，进口时须经国家质量监督检验检疫总局特许审批，限量进口，并要求附有出口国《检疫证书》，保证不带有此类病毒。入境后须经指定的隔离检疫站进行一年以上生育期检验，确认无病者，交还进口货主，并在隔离条件下繁殖无病毒种苗，才可允许用于生产种植。