产纤维素酶菌种的分离与筛选
产纤维素酶菌种的分离与筛选如下:
1、土样采集
土样的采集要选择富含纤维素的环境, 这是因为在纤维素含量丰富的环境, 通常会聚集较多的分解纤维素的微生物。
2、选择培养
选择培养需要的仪器:250mL锥形瓶、无菌称量瓶、药匙、1mL和10mL的移液管、天平、摇床、温度计等。培养基的制备:磷酸二氯钠0.1%,硫酸镁0.05%,硫酸铵1.5%,葡萄糖1.0%,玉米浆1.0%纤维素粉4%,PH值5.8~5.9,按比例制配培养基。在250mL锥形瓶中装入 30mL培养基。
用8层纱布做成瓶塞,将瓶口塞紧,再在瓶塞外包裹两层包装纸用线绳扎紧,在121℃下高压蒸汽灭菌20min。选择培养的操作:称取土样20g,在无菌条件下加入装有30mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上,在30℃下振荡培养1~2d,至培养基变混浊。
3、刚果红染色法分离
纤维素分解菌这一步所需要的仪器有:无菌培养皿、涂布器、1mL移液管,装有9mL无菌水的 20mL大试管,温箱等。培养基的制备:硫酸铵2g,硫酸镁0.5g,磷酸氢钾,氯化钠0.5g纤维素粉2g,刚果红0.4g琼脂22g水100ml。在500mL三角瓶中装入200mL培养基,在121℃下高压蒸汽灭菌20min。
倒平板操作
1、将灭菌后的固体培养基熔化,按无菌操作的要求,在无菌的培养皿中倒入15~20mL培养基,凝固后待用。制备菌悬液:按照稀释操作方法,将选择培养后的培养基进行等比稀释,稀释最大倍数至106。涂布平板:将稀释度为104~106的菌悬液各取0.1mL,滴加在平板培养基上,用涂布器将菌液涂布均匀,在30℃倒置培养,至菌落长出。
2、每个稀释度下需涂布 3 个平板, 并注意设置对照,在长出茵落的培养基上, 覆盖质量浓度为1mg/mI。的 CR溶液,10~15min后,倒去CR溶液,加入物质的量浓度为lmol/I。的NaCI溶液,15min后倒掉NaCl溶液,此时, 产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈。
答:液体发酵法液体发酵生产工艺过程是将玉米秸秆粉碎至20目以下进行灭菌处理,然后送发酵釜内发酵,同时加入纤维素酶菌种,发酵时间约为70h,温度低于60℃。采用除菌后的无菌空气从釜低通入进行通气搅拌,发酵完毕后的物料经压滤机板框过滤、超滤浓缩和喷雾干燥后制得纤维素酶产品。液态深层发酵由于具有培养条件...
答:(1)纤维素酶是一种复合酶,主要包括C 1 酶、C x 和葡萄糖苷酶,其中葡萄糖苷酶可以将纤维二糖分解为葡萄糖.培养基中的主要成分有碳源、氮源、水和无机盐等. (2)分离纤维素分解菌常用的方法是刚果红染色法.分离纤维素分解菌的实验流程是:土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别...
答:酵母菌缺乏纤维素酶,则不能分解蔗渣.如选择培养基中仅以纤维素作为碳源,可分离出具有纤维素酶的微生物.微生物可以产生多种酶,可根据蛋白质的不同特性的差异,经过分离纯化,获得纤维素酶.为了使酶可以回收和再利用,可以采用固定化技术,固定化酶的优点:酶既能与反应物接触,又能与产物分离;同...
答:(1)①环节需要的微生物能产生纤维素酶,这样的微生物在富含纤维素的环境中较多,可用碳源为纤维素的选择培养基获得.(2)为鉴定纤维素分解菌,可向培养基中加入刚果红染料,若存在纤维素分解菌,会产生透明圈.(3)酵母菌可以进行无氧呼吸产生酒精,故生产中可以满足④环节的常见菌种是酵母菌.(4...
答:本种酶制剂生产技术使用筛选所得枯草芽孢杆菌,利用淀粉质原料发酵生产淀粉酶、蛋白酶和半纤维素酶,菌种性能稳定,发酵活力高。发酵液通过不同路径的后提取工艺可得到不同使用级别的酶制剂产品。可提供菌种及工厂设计和工艺技术。 项目类别:新工艺 技术成熟程度:已产业化 知识产权状况:属实用新型专利 服务方式:合作开发...
答:(1)为获β-葡萄糖苷酶是微生物单菌落,可将上述菌液经梯度稀释后接种到固体培养基上;七叶苷在β-葡萄糖苷酶的催化下分解产生七叶素,与柠檬酸高铁铵反应形成黑色化合物,则要鉴定筛选菌株,需在培养基中额外添加七叶苷和柠檬酸高铁铵;由表中结果分析,菌种4产酶时间最短,形成黑色圈直径最大、...
答:并且培养的时候培养基应以纤维素为唯一碳源.(4)纤维素分解菌能够合成纤维素酶,为了使纤维素酶反复使用,可以对纤维素酶进行固定化处理,处理的方法有吸附法、共价键结合法和包埋法.故答案为:(1)纯培养 高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌(2)温度、pH、氧气浓度等 蒸馏(3)富含纤维素的 纤维...
答:ZA3~867纤维酶是上海植物生理研究所从野生型绿色木霉同各菌种中提取制成的,粗制品是多种酶的复合物,含有纤维素酶(包括C1、CX、B一葡萄糖苷酶等),果胶质,半纤维素酶等,分离细胞壁的效果较好。这种复合酶使用时不需加半纤维素酶和果胶酶等,就可以分离出植物原生质体。日本产的Onozuka纤维素酶常和果胶酶结合...
答:(1)①筛选纤维素分解菌需要使用一纤维素为唯一碳源的选择培养基,该培养基配方中纤维素是培养基的主要碳源,所以可以筛选纤维素分解菌.②刚果红染液可以鉴别纤维素分解菌,刚果红可以与纤维素结合成复合物而呈红色,纤维素分解菌可以产生纤维素酶分解纤维素而不能着色,使其菌落周围出现透明圈.③提取...
答:高温(3)高压蒸汽灭菌 无菌(4)稀释涂布平板法 平板划线法 菌液浓度过高 增大稀释倍数(或培养过程被杂菌污染 严格无菌操作;或用接种针划下一区域前接种针没有灭菌 每划一个新区域前都要对接种针进行灭菌处理)(原因与操作要对应)(5)温度 纤维素的量与浓度、反应时间、pH ...