dc-cik细胞培养流程图是怎样的
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-02
DC-CIK细胞培养流程图是怎样的
1．DC培养用细胞因子：
nGM-CSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)：
GM-CSF是一种造血生长因子，在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成，并具有促进早期红巨核细胞、嗜酸性祖细胞增殖和发育的功能。GM-CSF是最早被鉴定出来对于DC有作用的细胞因子之一。
GM-CSF在DC培养中的功能是促进单核细胞向大巨噬样细胞分化，细胞表面MHC II类分子的表达得以提高，从而增强细胞的抗原递呈功能。此外，GM-CSF还可促进DC的存活。
nIL-4 (白细胞介素-4)
IL-4在由单核细胞诱导成DC的过程中发挥的作用是抑制巨噬细胞的过度生长，从而引导单核细胞向DC方向分化。若培养体系中不加IL-4，单核细胞将分化为巨噬细胞。同时，IL-4还有降低细胞表面表达CD14分子的能力。CD14表达水平的降低是单核细胞分化为DC的重要标志。
GM-CSF和IL-4共同作用可使单核细胞定向分化为未成熟DC(immature DC)，此时的DC具有较强的抗原摄取和加工能力，但抗原递呈能力很弱。细胞表面中度表达MHC I类、II类分子和B7家族分子(CD80, CD86等)，但不表达CD14。
nTNF-a (肿瘤坏死因子-a)
TNF-a可下调未成熟DC的巨胞饮作用和表面Fc受体的表达，使细胞内MHC II类分子区室(class II compartment)消失，但能够上调细胞表面MHC I类、II类分子和B7家族分子(CD80, CD86等)的表达，使未成熟DC分化为成熟DC(mature DC)，此时DC的抗原摄取和加工能力明显减弱，而抗原递呈能力显著增强，可极强的激活T细胞。
2．CIK培养用细胞因子和抗体：
nCD3激发型单抗：
T细胞活化的第一信号来自于T细胞表面的受体，即T细胞抗原受体(T cell antigen receptor, TCR)与APC提呈的抗原的特异性结合，也就是T细胞对抗原的特异性识别。TCR是由2条不同肽链构成的异二聚体，在T细胞表面，其与CD3分子通过非共价键结合，形成TCR/CD3复合体。TCR识别特异性抗原后会引起CD3和T细胞表面的辅助受体CD4或CD8分子的胞浆尾部聚集，进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)进一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，从而引起激酶活化的级联反应(磷脂酰肌醇途径或MAP激酶途径等)，最终通过激活转录因子，使其进入细胞核内，结合于调控T细胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-g等)，引起基因的表达和转录，T细胞因而由静止状态转为增殖和活化状态。
由上可见，CD3分子在T细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。CD3激发型单抗与T细胞表面CD3分子特异性结合后，可引起CD3分子胞浆区ITAM基序中酪氨酸的磷酸化，进而导致T细胞增殖和活化的下游信号的激活，从而使T细胞增殖和活化。也就是说，CD3激发型单抗能够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程，从而引起T细胞的增殖与活化，因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺激因素。
此外，CD3激发型单抗在选用时一定要注意克隆号。研究表明，仅克隆号为OKT-3的CD3激发型单抗可以刺激所有人的T细胞的增殖，而其它克隆号的CD3激发型单抗仅能刺激一部分人的T细胞。因此，在进行CIK培养时，最好选用OKT-3克隆，以保证每个患者的T细胞均能被激活。
nIL-2 (白细胞介素-2)
IL-2最初发现时被称为T细胞生长因子(T cell growth factor, TCGF)，是引起T细胞增殖最重要的细胞因子。IL-2既是自分泌细胞因子，也是旁分泌细胞因子，其通过与T细胞表面的IL-2受体(IL-2R)的特异性结合而促使T细胞活化，并进入细胞分裂状态。此外，IL-2还可刺激NK细胞的生长并增强其杀伤能力。因此CIK细胞培养中须添加IL-2，以促进T细胞的增殖与活化。
nIFN-g (干扰素-g)
IFN-g 具有上调外周血淋巴细胞表面IL-2R表达的作用，因此会增强T细胞对IL-2促增殖反应的敏感度和强度。在诱导CIK细胞形成的过程中加入IFN- g ，可降低IL-2的用量。研究发现，IFN-g加入的顺序与CIK的细胞毒活性密切相关。先加入IFN- g，培养24后再加入IL-2，可明显提高CIK的细胞毒活性。
nIL-1a(白细胞介素-1a)
IL-1a也可以介导外周血淋巴细胞表面上调表达IL-2R。当IL-1a与IFN-g和激发型CD3单抗合用时，可以明显提高CIK 的细胞毒作用。
【细胞制备】
1．外周血单个核细胞的采集
1.1用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞80 - 100ml；
1.2淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞(PBMC)。
1.3无血清培养液洗涤2次，获得纯度在90%以上的PBMC，细胞数量需达到 1-3 x 108。
2．(可选步骤) 肿瘤抗原的制备
用于负载DC的肿瘤抗原可以是肿瘤特异性抗原肽(Tumor-Specific Antigens, TSA)或肿瘤相关抗原(Tumor-Associated Antigens, TAA)，也可以是肿瘤全细胞抗原。
用TSA或TAA负载的DC具有很好的靶向性，但该方法具有已确定的肿瘤特异性抗原或抗原肽种类少和单一抗原的免疫攻击经常无法杀伤肿瘤细胞等缺陷。而用肿瘤全细胞抗原负载DC可克服这些缺陷，因为此时无需知道那些抗原是肿瘤细胞的TSA或TAA，而且全抗原中的多种不同肿瘤抗原冲击DC可诱导产生针对不同抗原决定簇的细胞毒T 淋巴细胞(CTL)克隆，从而实现对肿瘤细胞的有效杀伤。
肿瘤细胞全抗原负载DC的方法很多，包括用肿瘤细胞裂解液负载DC、用凋亡肿瘤细胞负载DC、用坏死或死亡的肿瘤细胞负载DC，用肿瘤活细胞负载DC，和将肿瘤细胞与DC融合等。目前临床上常用的是用肿瘤细胞裂解液负载DC，因该方法简单、快速、有效。
反复冻融是获得肿瘤细胞裂解液的常见方法，具体步骤如下：
2.1手术切除肿瘤标本，无菌条件下，将坏死组织和癌旁非肿瘤组织去除干净；
2.2无菌生理盐水洗3次；
2.3用无菌的组织剪将肿瘤组织剪碎，加入RPMI 1640培养基，充分研磨；
2.4200目无菌网过滤后收集单细胞悬液；
2.5用RPMI 1640培养基重悬细胞至1-2 x 107/ml，装入5ml无菌冻存管中；
2.6将冻存管浸入液氮中速冻，10 min后取出，再迅速放入37℃水浴中解冻10 min。反复3-5次；
注：也可以-80℃/37℃反复冻融3-5次。
2.7将肿瘤裂解物加入离心管中，3000rpm，离心10min；
2.8收取上清，0.22mm滤膜过滤除菌，留样检测蛋白含量及细菌、真菌和支原体；
2.9-80oC保存备用。
3．CIK细胞的培养及鉴定
3.1步骤1中获得的PBMC 用无血清培养液调整细胞浓度至2 x 106/ml，置于培养瓶内；
3.237℃，5%CO2培养箱中孵育2h，以使单核细胞贴壁;
3.3收集悬浮细胞，用无血清培养液调整细胞浓度至1-2 x 106/ml；
3.4加入1 000 U/ml 的重组人IFN-g培养；
3.524h 后加入50ng/ml 的CD3 单克隆抗体和300 U/ml 的重组人IL-2，刺激CIK 细胞的生长和增殖；
注：此时也可同时加入100 U/ml的重组人IL-1a。
3.6每3天半量换液或扩瓶一次，并补加重组人IL-2 300 U/ml；
3.7在培养的第7d，收获CIK细胞，此时数量应达到1x 109个以上。
3.8CIK细胞质控：
3.8.1台盼蓝染色检测细胞活力：活细胞应在80%以上；
3.8.2用流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD8和CD56 等分子的表达，观察CD3+CD56+细胞的比例是否明显提高。
4．DC 细胞的培养及鉴定
4.1步骤3.2中剩下的贴壁细胞(主要是CD14+的单核细胞)，加入含重组人GM-CSF 500-1 000U/ml和重组人IL-4 500U/ml的无血清培养液，37℃，5%CO2培养箱中培养，诱导单核细胞向DC细胞分化；
4.2每3d 半量换液一次，并补足细胞因子；
4.3(可选步骤) 在培养的第5d， 加入步骤2中获得的肿瘤抗原50 mg/ml，对DC进行抗原负载；
注：若不对DC进行抗原负载，该步省略。
4.4在培养的第6d，加入重组人TNF-a(500U/ml)，诱导DC 细胞成熟；
4.5在培养的第7d或第8d，收获DC 细胞，其数量应达到1×106 个以上；
4.6DC的质检：
4.6.1台盼蓝染色检测细胞活力：活细胞应在80%以上；
4.6.2流式细胞仪检测DC 细胞表面HLA-DR、CD83 和CD86 等分子的表达，以确定DC是否成熟。
5. DC-CIK细胞的制备和质检
5.1收集步骤4和步骤3中所获得的DC 细胞和CIK 细胞，按1∶10 (数目比)的比例共培养，无血清培养液中添加重组人IL-2 (300 U/ml)；
5.2每3天半量换液一次，并补加重组人IL-2 (300U/ml)。
5.3在第7d 收集细胞，细胞数量应达到1×1010个以上；
5.4DC-CIK细胞的质检：
5.4.1台盼蓝染色检测：活细胞应在80%以上；
5.4.2流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD8、CD56等分子的表达：CD3+CD56+细胞的比例应在20%以上。
5.4.3细胞杀伤实验：以DC-CIK细胞为效应细胞，以肿瘤细胞(可为原代肿瘤细胞或肿瘤细胞株)为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按10 : 1(数目比) 的比例加入96 孔U 型板中，每孔含靶细胞1 x 104个，终体积为200 ml，设3个复孔。培养4h，然后取培养上清，用乳酸脱氢酶(LDH) 试剂盒检测效应细胞对靶细胞的杀伤率。
5.4.4收获细胞前，取少量培养物进行细菌、真菌培养，并检测支原体、衣原体，及内毒素(标准：病原学检测阴性，内毒素<5 Eu)。
抗癌免疫细胞疗法:DC、CIK、NK、TIL、γδT... 有何不同?
答：成熟DC细胞的“通讯意识强”， 能及时的向T淋巴细胞发送战报，刺激其发挥免疫效应。我们常听到的DC-CIK免疫疗法，就是将DC和CIK两者在体外共同培养，然后再回输至体内发挥杀伤肿瘤作用的。两种细胞相互作用，既促进DC成熟，又加强了CIK细胞杀伤作用。这也是2016年魏则西事件发生之前，医院生物免疫治疗科内...
CLS肿瘤生物治疗CLS细胞免疫疗法流程
答：在细胞培养完成后的第7至14天，治疗师会开始回输DC（树突状细胞）和CIK（细胞毒性免疫细胞）到患者体内。这些免疫细胞作为治疗的关键组成部分，它们被期待能够直接针对并消灭体内的肿瘤细胞。通过连续多个疗程的治疗，CLS细胞免疫疗法旨在有效地杀除肿瘤细胞，帮助患者恢复健康，提升生活质量。这个过程不仅关注...
DC-CIK作用
答：DC-CIK治疗的基本流程包括确定患者条件、检查、细胞动员、采集、细胞培养、获得DC-CIK细胞并回输，随后进行疗效评估和随访。DC-CIK适用于多种恶性肿瘤患者，但排除了心脏病、急性脑出血、严重呼吸障碍等疾病患者，以及对造影剂过敏者。在肝炎中，DC-CIK可能通过激活细胞和分泌细胞因子等方式对抗病毒。综上...
DC+CIKDC+CIK技术应用要求
答：实验室的建设不仅要求洁净度，还需要拥有一支高素质的技术团队。这些团队成员需具备国内外顶尖的生物科技研发和专业技术能力，以确保治疗技术的国际领先水平和质量的稳定保证。在细胞培养方面，DC-CIK细胞扩增技术非常关键。实验室通过精心培养，能够确保细胞浓度达到400倍以上，其中CD3+CD56+效应细胞的扩增更是...
CLS技术如何通过DC-CIK细胞实现精确杀伤肿瘤?
答：CLS自体免疫细胞治疗采用双养双输法，通过血细胞分离机从患者外周血中提取单核细胞，然后在GMP实验室中使用多种细胞因子进行诱导和肿瘤抗原致敏，形成活化的DC和CIK细胞。这两种细胞在共同培养过程中相互促进，数量和质量显著提升，确保了更高效地识别和消灭肿瘤细胞，从而带来更佳的治疗效果。CIK细胞，全称...
什么是DCCIK疗法?
答：而细胞因子诱导的杀伤细胞则是一组异质性细胞群，兼具T淋巴细胞强大的抗瘤活性和自然杀伤细胞的非主要组织相容性复合体限制性杀瘤优点。在DCCIK疗法中，患者的免疫细胞首先会被分离出来，然后在体外进行培养和激活。通过特定的细胞因子和抗原刺激，树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞会被激活并增殖，形成...
肿瘤生物治疗多长时间一个疗程,需做几个疗程?
答：了解了肿瘤生物治疗疗程问题，我们来看一下肿瘤生物治疗的过程： 通过细胞分离机采集病人外周血 ↓↓ GMP标准实验室细胞分离，刺激细胞活化增殖 ↓↓ 细胞杀伤力增加20到100倍 ↓↓培养细胞向病人回输DCCIK细胞 ↓↓ 通过杀死肿瘤细胞，促进患者康复 如果需要了解更多关于肿瘤生物治疗方面的知识，如肿瘤生物...
怎样开展细胞疗法啊?
答：你问怎么开展…1、从体内外周血提取相关的免疫细胞 2、在GMP实验室里，分离单个核细胞置于培养瓶中，加入培养液和细胞因子刺激细胞活化增值。3、经过7~14天细胞培养，细胞数增至原有数量的几百到上千倍，免疫杀伤能力增加20~100倍。4、采血后的第7~14天，开始回输DC、CIK细胞。5、经过多个疗程的...
什么是DC-CIK方法?
答：简单地说，DC是诱导细胞，CIK是消灭癌细胞的部队！治疗的有效率不在于医生的专业，而在于实验室工作人员的努力。同样一袋培养好的细胞打进去，cik细胞的数量越多，效果就越好。DC细胞分自体血采集的和异体采集的。相对来所异体血采集培养后的细胞效果更好，但是这个目前还没有被国家认可，只允许做自体血...
CLS生物技术CLS细胞疗法
答：在肿瘤生物免疫治疗领域，CLS细胞疗法，也被称为自体免疫细胞治疗技术，占据了重要地位。这种疗法的核心是DC-CIK细胞疗法。DC-CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞，其生成过程是将患者的外周血淋巴细胞在体外与多种细胞因子共同培养，形成一个异质性细胞群。CIK细胞以其显著特性脱颖而出，它们具有快速增殖、...
DC-CIK细胞肿瘤生物治疗技术，是利用树突状细胞（DC细胞）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）两种细胞联合治疗肿瘤。
目前国内DC-CIK细胞培养技术良莠不齐，齐氏生物认为主要存在以下缺点：
1. 分离得到的细胞纯度低，活性小。
2. CIK细胞增殖速度缓慢。目前国内培养的CIK细胞增殖速度缓慢，无法达到肿瘤病人治疗所需要的数量级。
3. 有效抑瘤因子表达水平低。CIK细胞的细胞毒性与CD3+CD56+的表达成正相关趋势。目前国内培养的CIK细胞中CD3+CD56+的表达低下，不足10%。
下图为细胞培养流程图：
建议使用试剂盒进行DC-CIK细胞培养
1、试剂盒采用密度梯度离心法分离外周血，得到的细胞纯度达95%以上，细胞活性达98%以上。
2、在培养CIK细胞14天后，细胞数量已达到2*109，充分达到肿瘤病人治疗所需的有效数量级。
3. 试剂盒培养的CIK细胞中CD3+CD56+的表达高达32%，具有更好的临床效应。
希望能帮到你！
1、 签署外周血单个核细胞采集知情同意书。2、 瞩患者采集前一天晚上勿进食荤腥油腻，饮食以清淡素食为主。3、 采集前一天与麻醉科联系，采集当日早上8点行桡动脉穿刺置管术，肝素封管后，病人及家属到血液科东11楼采集室，签署采集知情同意书。4、 采集当天早上急查血常规（九点前拿到化验单，随病历带到血液科）。5、 采集收费：单采收费根据病人总的循环量而定以4000ml为基准. 1. 采集后7天至血液科，签署免疫接种治疗知情同意书后行皮内或胸腔DC接种，采集后9到10天行DC-CIK静脉输注。2. 一般每月行上述接种治疗1次，共4-8次。3. 如与化疗结合，接种时机在化疗后2-5天为佳。4. 免疫接种治疗后需在我科观察有无发热、过敏等副反应，每2小时记录血压、心率、体温等生命体征（至少4次）。5. 体温大于38.5°，口服塞来西布（西乐葆）200mg。6. 如有胸闷、气喘、血压改变，立即予氢化可的松琥珀酸钠100mg快速静滴，异丙嗪注射液25mg肌注。7. 如有皮疹、瘙痒等，立即予异丙嗪注射液25mg肌注，持续皮疹予扑尔敏等抗过敏药物治疗至皮疹消失。 1、血细胞单采医嘱输入：静脉留置针1根 留置静脉针1次3M透明贴膜1张血细胞分离单采（治疗性单采）1次血细胞分离单采（治疗性单采）加收 N次生理盐水1000ml 采集用血液保存液500ml×3袋 采集用2、DC-CIK免疫治疗医嘱输入：异丙嗪注射液 12.5mg 肌注 DC-CIK输注前15分钟细胞因子活化杀伤（DC-CIK）细胞输注生理盐水100ml 静滴生理盐水500ml×2 体外培养用一次性使用无菌注射器 20ml×2支 体外培养用一次性使用无菌注射器 1ml×2支 体外培养用重组白细胞介素2（德路生）100万u×1支 体外培养用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（特尔立）150ug×1支（首次治疗时收取1次）
1．DC培养用细胞因子：
nGM-CSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)：
GM-CSF是一种造血生长因子，在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成，并具有促进早期红巨核细胞、嗜酸性祖细胞增殖和发育的功能。GM-CSF是最早被鉴定出来对于DC有作用的细胞因子之一。
GM-CSF在DC培养中的功能是促进单核细胞向大巨噬样细胞分化，细胞表面MHC II类分子的表达得以提高，从而增强细胞的抗原递呈功能。此外，GM-CSF还可促进DC的存活。
nIL-4 (白细胞介素-4)
IL-4在由单核细胞诱导成DC的过程中发挥的作用是抑制巨噬细胞的过度生长，从而引导单核细胞向DC方向分化。若培养体系中不加IL-4，单核细胞将分化为巨噬细胞。同时，IL-4还有降低细胞表面表达CD14分子的能力。CD14表达水平的降低是单核细胞分化为DC的重要标志。
GM-CSF和IL-4共同作用可使单核细胞定向分化为未成熟DC(immature DC)，此时的DC具有较强的抗原摄取和加工能力，但抗原递呈能力很弱。细胞表面中度表达MHC I类、II类分子和B7家族分子(CD80, CD86等)，但不表达CD14。
nTNF-a (肿瘤坏死因子-a)
TNF-a可下调未成熟DC的巨胞饮作用和表面Fc受体的表达，使细胞内MHC II类分子区室(class II compartment)消失，但能够上调细胞表面MHC I类、II类分子和B7家族分子(CD80, CD86等)的表达，使未成熟DC分化为成熟DC(mature DC)，此时DC的抗原摄取和加工能力明显减弱，而抗原递呈能力显著增强，可极强的激活T细胞。
2．CIK培养用细胞因子和抗体：
nCD3激发型单抗：
T细胞活化的第一信号来自于T细胞表面的受体，即T细胞抗原受体(T cell antigen receptor, TCR)与APC提呈的抗原的特异性结合，也就是T细胞对抗原的特异性识别。TCR是由2条不同肽链构成的异二聚体，在T细胞表面，其与CD3分子通过非共价键结合，形成TCR/CD3复合体。TCR识别特异性抗原后会引起CD3和T细胞表面的辅助受体CD4或CD8分子的胞浆尾部聚集，进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)进一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，从而引起激酶活化的级联反应(磷脂酰肌醇途径或MAP激酶途径等)，最终通过激活转录因子，使其进入细胞核内，结合于调控T细胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-g等)，引起基因的表达和转录，T细胞因而由静止状态转为增殖和活化状态。
由上可见，CD3分子在T细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。CD3激发型单抗与T细胞表面CD3分子特异性结合后，可引起CD3分子胞浆区ITAM基序中酪氨酸的磷酸化，进而导致T细胞增殖和活化的下游信号的激活，从而使T细胞增殖和活化。也就是说，CD3激发型单抗能够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程，从而引起T细胞的增殖与活化，因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺激因素。
此外，CD3激发型单抗在选用时一定要注意克隆号。研究表明，仅克隆号为OKT-3的CD3激发型单抗可以刺激所有人的T细胞的增殖，而其它克隆号的CD3激发型单抗仅能刺激一部分人的T细胞。因此，在进行CIK培养时，最好选用OKT-3克隆，以保证每个患者的T细胞均能被激活。
nIL-2 (白细胞介素-2)
IL-2最初发现时被称为T细胞生长因子(T cell growth factor, TCGF)，是引起T细胞增殖最重要的细胞因子。IL-2既是自分泌细胞因子，也是旁分泌细胞因子，其通过与T细胞表面的IL-2受体(IL-2R)的特异性结合而促使T细胞活化，并进入细胞分裂状态。此外，IL-2还可刺激NK细胞的生长并增强其杀伤能力。因此CIK细胞培养中须添加IL-2，以促进T细胞的增殖与活化。
nIFN-g (干扰素-g)
IFN-g 具有上调外周血淋巴细胞表面IL-2R表达的作用，因此会增强T细胞对IL-2促增殖反应的敏感度和强度。在诱导CIK细胞形成的过程中加入IFN- g ，可降低IL-2的用量。研究发现，IFN-g加入的顺序与CIK的细胞毒活性密切相关。先加入IFN- g，培养24后再加入IL-2，可明显提高CIK的细胞毒活性。
nIL-1a(白细胞介素-1a)
IL-1a也可以介导外周血淋巴细胞表面上调表达IL-2R。当IL-1a与IFN-g和激发型CD3单抗合用时，可以明显提高CIK 的细胞毒作用。
【细胞制备】
1．外周血单个核细胞的采集
1.1用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞80 - 100ml；
1.2淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞(PBMC)。
1.3无血清培养液洗涤2次，获得纯度在90%以上的PBMC，细胞数量需达到 1-3 x 108。
2．(可选步骤) 肿瘤抗原的制备
用于负载DC的肿瘤抗原可以是肿瘤特异性抗原肽(Tumor-Specific Antigens, TSA)或肿瘤相关抗原(Tumor-Associated Antigens, TAA)，也可以是肿瘤全细胞抗原。
用TSA或TAA负载的DC具有很好的靶向性，但该方法具有已确定的肿瘤特异性抗原或抗原肽种类少和单一抗原的免疫攻击经常无法杀伤肿瘤细胞等缺陷。而用肿瘤全细胞抗原负载DC可克服这些缺陷，因为此时无需知道那些抗原是肿瘤细胞的TSA或TAA，而且全抗原中的多种不同肿瘤抗原冲击DC可诱导产生针对不同抗原决定簇的细胞毒T 淋巴细胞(CTL)克隆，从而实现对肿瘤细胞的有效杀伤。
肿瘤细胞全抗原负载DC的方法很多，包括用肿瘤细胞裂解液负载DC、用凋亡肿瘤细胞负载DC、用坏死或死亡的肿瘤细胞负载DC，用肿瘤活细胞负载DC，和将肿瘤细胞与DC融合等。目前临床上常用的是用肿瘤细胞裂解液负载DC，因该方法简单、快速、有效。
反复冻融是获得肿瘤细胞裂解液的常见方法，具体步骤如下：
2.1手术切除肿瘤标本，无菌条件下，将坏死组织和癌旁非肿瘤组织去除干净；
2.2无菌生理盐水洗3次；
2.3用无菌的组织剪将肿瘤组织剪碎，加入RPMI 1640培养基，充分研磨；
2.4200目无菌网过滤后收集单细胞悬液；
2.5用RPMI 1640培养基重悬细胞至1-2 x 107/ml，装入5ml无菌冻存管中；
2.6将冻存管浸入液氮中速冻，10 min后取出，再迅速放入37℃水浴中解冻10 min。反复3-5次；
注：也可以-80℃/37℃反复冻融3-5次。
2.7将肿瘤裂解物加入离心管中，3000rpm，离心10min；
2.8收取上清，0.22mm滤膜过滤除菌，留样检测蛋白含量及细菌、真菌和支原体；
2.9-80oC保存备用。
3．CIK细胞的培养及鉴定
3.1步骤1中获得的PBMC 用无血清培养液调整细胞浓度至2 x 106/ml，置于培养瓶内；
3.237℃，5%CO2培养箱中孵育2h，以使单核细胞贴壁;
3.3收集悬浮细胞，用无血清培养液调整细胞浓度至1-2 x 106/ml；
3.4加入1 000 U/ml 的重组人IFN-g培养；
3.524h 后加入50ng/ml 的CD3 单克隆抗体和300 U/ml 的重组人IL-2，刺激CIK 细胞的生长和增殖；
注：此时也可同时加入100 U/ml的重组人IL-1a。
3.6每3天半量换液或扩瓶一次，并补加重组人IL-2 300 U/ml；
3.7在培养的第7d，收获CIK细胞，此时数量应达到1x 109个以上。
3.8CIK细胞质控：
3.8.1台盼蓝染色检测细胞活力：活细胞应在80%以上；
3.8.2用流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD8和CD56 等分子的表达，观察CD3+CD56+细胞的比例是否明显提高。
4．DC 细胞的培养及鉴定
4.1步骤3.2中剩下的贴壁细胞(主要是CD14+的单核细胞)，加入含重组人GM-CSF 500-1 000U/ml和重组人IL-4 500U/ml的无血清培养液，37℃，5%CO2培养箱中培养，诱导单核细胞向DC细胞分化；
4.2每3d 半量换液一次，并补足细胞因子；
4.3(可选步骤) 在培养的第5d， 加入步骤2中获得的肿瘤抗原50 mg/ml，对DC进行抗原负载；
注：若不对DC进行抗原负载，该步省略。
4.4在培养的第6d，加入重组人TNF-a(500U/ml)，诱导DC 细胞成熟；
4.5在培养的第7d或第8d，收获DC 细胞，其数量应达到1×106 个以上；
4.6DC的质检：
4.6.1台盼蓝染色检测细胞活力：活细胞应在80%以上；
4.6.2流式细胞仪检测DC 细胞表面HLA-DR、CD83 和CD86 等分子的表达，以确定DC是否成熟。
5. DC-CIK细胞的制备和质检
5.1收集步骤4和步骤3中所获得的DC 细胞和CIK 细胞，按1∶10 (数目比)的比例共培养，无血清培养液中添加重组人IL-2 (300 U/ml)；
5.2每3天半量换液一次，并补加重组人IL-2 (300U/ml)。
5.3在第7d 收集细胞，细胞数量应达到1×1010个以上；
5.4DC-CIK细胞的质检：
5.4.1台盼蓝染色检测：活细胞应在80%以上；
5.4.2流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD8、CD56等分子的表达：CD3+CD56+细胞的比例应在20%以上。
5.4.3细胞杀伤实验：以DC-CIK细胞为效应细胞，以肿瘤细胞(可为原代肿瘤细胞或肿瘤细胞株)为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按10 : 1(数目比) 的比例加入96 孔U 型板中，每孔含靶细胞1 x 104个，终体积为200 ml，设3个复孔。培养4h，然后取培养上清，用乳酸脱氢酶(LDH) 试剂盒检测效应细胞对靶细胞的杀伤率。
5.4.4收获细胞前，取少量培养物进行细菌、真菌培养，并检测支原体、衣原体，及内毒素(标准：病原学检测阴性，内毒素<5 Eu)。
答：成熟DC细胞的“通讯意识强”， 能及时的向T淋巴细胞发送战报，刺激其发挥免疫效应。我们常听到的DC-CIK免疫疗法，就是将DC和CIK两者在体外共同培养，然后再回输至体内发挥杀伤肿瘤作用的。两种细胞相互作用，既促进DC成熟，又加强了CIK细胞杀伤作用。这也是2016年魏则西事件发生之前，医院生物免疫治疗科内...
答：在细胞培养完成后的第7至14天，治疗师会开始回输DC（树突状细胞）和CIK（细胞毒性免疫细胞）到患者体内。这些免疫细胞作为治疗的关键组成部分，它们被期待能够直接针对并消灭体内的肿瘤细胞。通过连续多个疗程的治疗，CLS细胞免疫疗法旨在有效地杀除肿瘤细胞，帮助患者恢复健康，提升生活质量。这个过程不仅关注...
答：DC-CIK治疗的基本流程包括确定患者条件、检查、细胞动员、采集、细胞培养、获得DC-CIK细胞并回输，随后进行疗效评估和随访。DC-CIK适用于多种恶性肿瘤患者，但排除了心脏病、急性脑出血、严重呼吸障碍等疾病患者，以及对造影剂过敏者。在肝炎中，DC-CIK可能通过激活细胞和分泌细胞因子等方式对抗病毒。综上...
答：实验室的建设不仅要求洁净度，还需要拥有一支高素质的技术团队。这些团队成员需具备国内外顶尖的生物科技研发和专业技术能力，以确保治疗技术的国际领先水平和质量的稳定保证。在细胞培养方面，DC-CIK细胞扩增技术非常关键。实验室通过精心培养，能够确保细胞浓度达到400倍以上，其中CD3+CD56+效应细胞的扩增更是...
答：CLS自体免疫细胞治疗采用双养双输法，通过血细胞分离机从患者外周血中提取单核细胞，然后在GMP实验室中使用多种细胞因子进行诱导和肿瘤抗原致敏，形成活化的DC和CIK细胞。这两种细胞在共同培养过程中相互促进，数量和质量显著提升，确保了更高效地识别和消灭肿瘤细胞，从而带来更佳的治疗效果。CIK细胞，全称...
答：而细胞因子诱导的杀伤细胞则是一组异质性细胞群，兼具T淋巴细胞强大的抗瘤活性和自然杀伤细胞的非主要组织相容性复合体限制性杀瘤优点。在DCCIK疗法中，患者的免疫细胞首先会被分离出来，然后在体外进行培养和激活。通过特定的细胞因子和抗原刺激，树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞会被激活并增殖，形成...
答：了解了肿瘤生物治疗疗程问题，我们来看一下肿瘤生物治疗的过程： 通过细胞分离机采集病人外周血 ↓↓ GMP标准实验室细胞分离，刺激细胞活化增殖 ↓↓ 细胞杀伤力增加20到100倍 ↓↓培养细胞向病人回输DCCIK细胞 ↓↓ 通过杀死肿瘤细胞，促进患者康复 如果需要了解更多关于肿瘤生物治疗方面的知识，如肿瘤生物...
答：你问怎么开展…1、从体内外周血提取相关的免疫细胞 2、在GMP实验室里，分离单个核细胞置于培养瓶中，加入培养液和细胞因子刺激细胞活化增值。3、经过7~14天细胞培养，细胞数增至原有数量的几百到上千倍，免疫杀伤能力增加20~100倍。4、采血后的第7~14天，开始回输DC、CIK细胞。5、经过多个疗程的...
答：简单地说，DC是诱导细胞，CIK是消灭癌细胞的部队！治疗的有效率不在于医生的专业，而在于实验室工作人员的努力。同样一袋培养好的细胞打进去，cik细胞的数量越多，效果就越好。DC细胞分自体血采集的和异体采集的。相对来所异体血采集培养后的细胞效果更好，但是这个目前还没有被国家认可，只允许做自体血...
答：在肿瘤生物免疫治疗领域，CLS细胞疗法，也被称为自体免疫细胞治疗技术，占据了重要地位。这种疗法的核心是DC-CIK细胞疗法。DC-CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞，其生成过程是将患者的外周血淋巴细胞在体外与多种细胞因子共同培养，形成一个异质性细胞群。CIK细胞以其显著特性脱颖而出，它们具有快速增殖、...
