糖发酵试验中培养基灭菌后,还没接种菌株,为什么溴麝香草酚蓝就变黄?
下列各类培养基常用于测定细菌的糖类代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、碳源和氮源利用试验等生化反应。
1.糖、醇发酵培养基
（1）成分
基础液
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
0.5%酸性品红指示液 10ml
（或0.4%溴麝香草酚蓝指示液） （6ml）
水 1000ml
糖、醇类 每100ml基础液内各加0.5g
（2）制法 取蛋白胨和氯化钠加入水中，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入指示液混匀。每100ml分别加入1种糖、醇或糖苷，混匀后分装于小管中（若需观察产气反应，在小管内另放置杜汉小倒管）。于116℃灭菌15分钟。
常用的糖、醇或糖苷：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纤维二糖、蜜二糖、棉子糖、松三糖、菊糖、糊精、淀粉、甘露醇、卫矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水杨素、七叶苷等。
（3）用途 鉴别各种细菌对糖类的发酵生化反应，发酵者产酸，培养基变色（加酸性品红者由无色至红色或再至黄色；加溴麝香草酚蓝者由蓝色至黄色）；产气时，小倒管内有小气泡。
2.七叶苷培养基
（1）成分
蛋白胨 5g 七叶苷 3g
磷酸氢二钾 1g 水 1000ml
枸橼酸铁 0.5g
（2）制法 除七叶苷外，取上述成分混合，微温使溶解，加入七叶苷混匀，调pH值使灭菌后为7.3±0.1,分装于试管中，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌对七叶苷的水解试验，产生棕黑色沉淀为阳性反应。
3.磷酸盐葡萄糖胨水培养基
（1）成分
蛋白胨 7g 葡萄糖 5g
磷酸氢二钾 3.8g 水 1000ml
（2）制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌的甲基红试验（M-R反应）和乙酰甲基甲醇试验（V-P反应）。
①甲基红试验（M-R反应） 取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35℃培养2~5天，于培养管内加入甲基红指示液（称取甲基红0.1g，加95%乙醇300ml,使溶解后，加水至500ml）数滴，立即观察，呈鲜红色或橘红色为阳性，呈黄色为阴性。
②乙酰甲基甲醇生成试验（V-P反应） 取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35℃培养48小时，量取2ml培养液，加入萘酚乙醇试液（称取α-萘酚5g，加无水乙醇溶解使成100ml）1ml，混匀，再加40%氢氧化钾溶液0.4ml，充分振摇，立刻或数分钟内出现红色，即为阳性反应；无红色反应为阴性，如为阴性反应，置35℃水浴4小时后再观察。
4.蛋白胨水培养基
（1）成分
蛋白胨 10g 水 1000ml
氯化钠 5g
（2）制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。
①靛基质试验 取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基中，置35℃培养24~48小时，必要时培养4~5天，沿管壁加入靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。
②靛基质试液 称取对二甲氨基苯甲醛5g，加入戊醇（或异戊醇）75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸25ml徐徐滴人，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深。或称取对二甲氨基苯甲醛1g，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸20ml徐徐滴入。
5.三糖铁琼脂培养基
（1）成分
蛋白胨 20g 硫酸亚铁 0.2g
牛肉浸出粉 5g 硫代硫酸钠 0.2g
乳糖 10g 0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
蔗糖 10g 琼脂 12~15g
葡萄糖 1g 水 1000ml
氯化钠 5g
（2）制法 除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0,1，加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121℃灭菌15分钟，制成高底层（2~75px）短斜面。
（3）用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。
方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿剌和斜面划线接种，置35℃培养24~48小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层变黄色为乳糖、蔗糖发酵阳性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
6.克氏双糖铁琼脂培养基
（1）成分
蛋白胨 20g 枸橼酸铁 0.3g
牛肉浸粉 3g 硫代硫酸钠 0.3g
酵母浸粉 3g 0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
乳糖 10g 琼脂 12~15g
葡萄糖 1g 水 1000ml
氯化钠 5g
（2）制法 除乳糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121℃灭菌15分钟，制成髙底层（2~75px）短斜面。
（3）用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。
方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做髙层穿刺和斜面划线接种，置35℃培养24~48小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层呈黄色为乳糖发酵阳性，斜面层呈红色为乳糖发酵阴性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
7.脲（尿素）培养基
（1）成分
蛋白胨 1g 0.2%酚红溶液 6ml
葡萄糖 1g 20%无菌脲溶液 100ml
氯化钠 5g 水 1000ml
磷酸氢二钾 2g
（2）制法 除脲溶液外，取上述成分，混合，调pH值使灭菌后为6.9±0.1，混匀后，121℃灭菌15分钟，冷至50~55℃，加入无菌脲溶液（经膜除菌过滤），混匀，分装于灭菌试管中。
（3）用途 用于鉴别细菌的尿素酶反应。
方法和结果观察：取可疑菌落或少量斜面培养物接种于培养基内，置35℃培养24小时，观察结果。培养基变为红色为尿素酶反应阳性；不变色为阴性，阴性者需延长观察至1周。
8.苯丙氨酸琼脂培养基
（1）成分
磷酸氢二钠 1g 氯化钠 5g
酵母浸膏 3g 琼脂 12~15g
DL-苯丙氨酸（DL-phenylalanine） 2g 水 1000ml
（或L-苯丙氨酸） （1g）
（2）制法 除琼脂外，取各成分溶于水，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，再加入琼脂，加热溶胀，分装试管，121℃灭菌15分钟，制成长斜面。
（3）用途 用于鉴别细菌的苯丙氨酸脱氨酶试验（也称苯丙酮酸试验）。
方法和结果观察：取斜面培养物，大量接种于苯丙氨酸琼脂斜面，置35℃培养4小时或18~24小时，取4~5滴10%三氯化铁溶液试剂，由斜面上部流下，若出现墨绿色，即为苯丙氨酸脱氨酶试验阳性；倘若不变色则为阴性。
9.氨基酸脱羧酶试验培养基
（1）成分
①基础液
蛋白胨 5g 1.6%溴甲酚紫指示液 1ml
酵母浸出粉 3g 水 1000ml
葡萄糖 1g
②氨基酸
L-赖氨酸 0.5g（需加碱溶液溶解）
L-鸟氨酸 0.5g（需加碱溶液溶解）
L-精氨酸 0.5g（不需加碱溶液溶解）
（2）制法 先配制基础液备用；将溶解后的3种氨基酸，各分别加至100ml基础液（使氨基酸的终浓度为0.5%），混匀，调pH值使灭菌后为6.8。分装于小试管中，每管2.5ml并滴加1层液体石蜡；同时分装一部分基础液于小试管，作为对照培养基，均置116℃灭菌10分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌的脱羧酶、双水解酶试验。
方法和结果观察：取疑似菌斜面培养物分别接种于上述3种培养基及基础液对照培养基，置35℃培养24~48小时。在培养初期由于待检细菌发酵葡萄糖产酸，试验培养基和对照培养基应呈黄色，继续培养时，试验培养基如呈紫色或紫红色，即为阳性反应；如至培养末期，培养基仍同对照管呈黄色，则判为阴性反应。
10.明胶培养基
（1）成分
蛋白胨 5g 明胶 120g
牛肉浸出粉 3g 水 1000ml
（2）制法 取上述成分加入水中，浸泡约20分钟，加热溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于细菌的明胶液化试验。
方法和结果观察：取少量待检菌斜面培养物穿刺接种于明胶培养基内，置35℃培养24小时，取出置冰箱内10~20分钟。如培养基仍呈溶液状，则为阳性；培养基重新凝固，则为阴性。细菌液化明胶之作用有时甚为缓慢，如未见液化，需继续培养1~2周方可确定阴性。
11.丙二酸钠培养基
（1）成分
酵母浸出粉 1g 磷酸二氢钾 0.4g
氯化钠 2g 丙二酸钠 3g
葡萄糖 0.25g 0.4%溴麝香草酚蓝指示液 6ml
硫酸铵 2g 水 1000ml
磷酸氢二钾 0.6g
（2）制法 除指示液外，将上述成分溶解，调pH值使灭菌后为6.8，再加入指示液。分装小管中，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌能否利用丙二酸钠作为碳源而生长繁殖。
方法和结果观察：取斜面或肉汤培养物接种于丙二酸钠培养基内，置35℃培养48小时。于24小时和48小时后各观察1次结果。培养基颜色由绿色变成蓝色为阳性反应；无颜色变化，或由绿色变成黄色，则为阴性反应。
12.枸橼酸盐培养基
（1）成分
氯化钠 5g 枸橼酸钠（无水） 2g
硫酸镁 0.2g 1.0%溴麝香草酚蓝指示液 10ml
磷酸氢二钾 1g 琼脂 14g
磷酸二氢铵 1g 水 1000ml
（2）制法 除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为6.9±0.1，加入琼脂，加热溶胀，然后加入指示液，混匀，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟，制成斜面。
（3）用途 用于鉴别细菌能否利用枸橼酸盐作为碳源和氮源而生长繁殖。
方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，一般培养48~72小时，凡能在培养基斜面生长出菌落，培养基即由绿色变成蓝色者为阳性反应；无菌落生长，培养基仍绿色者为阴性反应，阴性反应者应继续培养观察至7天。
13.硝酸盐胨水培养基
（1）成分
蛋白胨 10g 硝酸钾 2g
酵母浸出粉 3g 水 1000ml
（2）制法 取上述成分，加热溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0,1,分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌能否还原硝酸盐成亚硝酸盐。方法和结果观察：取待检菌培养物接种于硝酸盐胨水培养基中，置35℃培养24小时。将下列甲液和乙液于用前等量混合，每个培养物加混合物0.1ml，产生红色为阳性反应，不产生红色为阴性反应。
甲液：称取α-萘胺5g，溶解于5mol/L醋酸1000ml中。
乙液：称取磺胺酸（对氨基苯磺酸）8g，溶解于5mol/L醋酸1000ml中。
14.石蕊牛奶培养基
（1）成分
脱脂奶粉 10g 水 100ml
10%石蕊溶液 0.65ml
（2）制法 取上述成分混匀后，分装于小试管中，116℃灭菌10分钟。
（3）用途 用于检查细菌对牛奶的凝固和发酵作用。
15.半固体营养琼脂培养基
（1）成分
蛋白胨 10g 琼脂 4g
牛肉浸出粉 3g 水 1000ml
氯化钠 5g
（2）制法 除琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.2±0.2,再加入琼脂，加热溶胀，分装于小管中，121℃灭菌15分钟后，直立放置。待凝固后备用。
（3）用途 用于观察细菌的动力，也可用于一般菌种的保存。
细菌动力检查：取疑似菌斜面培养物穿刺接种于半固体营养琼脂培养基中，置35℃培养24小时，细菌沿穿刺外周扩散生长，为动力阳性；否则为阴性。阴性者，应再继续培养观察2~3天。
A、二氧化碳可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄色，因此可以用溴麝香草酚蓝水溶液检测二氧化碳，A正确；B、健那绿是线粒体的活体染色剂，能使线粒体呈现蓝绿色，因此可以用健那绿对人的口腔上皮细胞进行染色，观察线粒体，B正确；C、洋葱表皮细胞具有细胞壁，因此浸润在清水中的洋葱表皮细胞不会因为吸收过多而涨破，C错误；D、斐林试剂的氢氧化钠和硫酸铜的混合液，用斐林试剂检测还原糖需要水浴加热，为加热前，溶液呈蓝色，D正确．故选：C．
培养基中的糖类物质在高压灭菌后，会形成糖酸等一系列酸性物质，灭菌后培养基的ph会下降。一般实验室中，如果对ph要求较高，可以将糖类过滤灭菌，待培养基高压灭菌后，再加入。
答：小管倒置后，倒入液体培养基，显然是不可能自动被液体灌满的。被灌满的过程是出现在高温高压灭菌消毒过程中，此时因为温度高，小管内的空气不断随着分子运动被排出，冷却后就只剩下液体了，也就是被灌满了。
答：VP试验 微生物检验中常用的生化反应之一。某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。试验方法：1）O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于...
答：写的多并不一定有用，乳糖胆盐发酵培养基验证大肠菌群主要是判定阴性还是阳性的，而不是验证有无大肠菌群的。是通过产酸产气来判定的，但产酸产气并不能判定直接判定，第一次单料培养如果不产酸产气，则一定为阴性。在食品检验中可以直接报告，如过产酸产气则要接种进行双料培养，双料培养不产酸产...
答：GB 4789.3-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》中的规定操作步骤：1、乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。2、分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察...
答：是乳糖发酵培养基 乳糖发酵试验使用乳糖胆盐发酵培养基，细菌分解糖类是依靠细菌细胞所产生的各种酶类的作用，细菌产生的分解糖的酶随细菌种类不同而异，可以此鉴别细菌。大肠杆菌能分解乳糖而产生酸，使培养基的pH降低（指示剂变色）。这一现象可作为观察结果的指标。大肠杆菌细胞在酸性环境中，由于甲酸脱...
答：你的理解应该存在错误。进行粪大肠菌群检验时，应该先将初发酵和复发酵的培养基准备好，然后再进行接种，其中复发酵所使用的就是EC肉汤。而并不是用的时候才取EC肉汤。首先将样品接种在乳糖发酵管或者乳糖胆盐发酵管中，进行初发酵，如果初发酵为阳性，则需要进行复发酵确证。此时，将初发酵阳性管用接种...
答：（3）甲基红试验：产气杆菌使丙酮酸脱羧后形成中性产物，培养液pH＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性，大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，培养液呈酸性pH＜5.4，指示剂甲基红呈红色，称甲基红试验（Methyl red test,MR）阳性。（4）枸橼酸盐利用试验（Citrate ultiliazation test）:能利用...
答：氧化-发酵试验是确定非发酵菌与发酵菌及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。Hugh-Leifson设计的O-F培养基只含0.2%蛋白胨、1%的糖和指示剂溴麝香草酚蓝。检测时接种细菌于2管O-F培养基，在第一管培养基的表面加盖一层无菌液体石蜡或无菌溶解凡士林(称...
答：是一种革兰氏阴性菌，属于肠道菌群中的常见菌种之一。在糖发酵试验中，大肠杆菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢，并产生乳酸和二氧化碳两种产物。大肠杆菌通过代谢葡萄糖，将其转化为丙酮酸和乳酸。其中，乳酸是一种有机酸，会使培养基的pH值下降，从而产生酸性反应；同时，代谢过程中产生的二氧化碳会被释放出来...
答：葡萄糖发酵试验必为阳性，甲基红试验：细菌在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红，这时候为甲基红试验阳性。
