如何鉴定大肠杆菌
大肠杆菌是人和动物肠道等处的常在菌，禽大肠杆菌在鸡场普遍存在，特别是通风不良，大量积粪鸡舍，在垫料、空气尘埃、污染用具和道路、粪场及孵化厅等处环境中染菌最高。
本病主要发生在密集化养禽场，各种禽类不分品种性别、日龄均对本菌易感。特别幼龄禽类发病最多，如污秽、拥挤、潮湿通风不良的环境，过冷过热或温差很大的气候，有毒有害气体（氨气或硫化氢等）长期存在，饲养管理失调，营养不良（特别是维生素的缺乏）以及病原微生物（如支原体及病毒）感染所造成的应激等均可促进本病的发生。
临床症状与病理变化
本病常引起幼雏或成鸡急性死亡。特征性病变是肝脏呈绿色和胸肌充血，肝脏边缘纯圆，外有纤维素性白色包膜。也可能发生下列病变
1.心包炎:心外膜水肿，心包囊内充满淡黄色纤维素性渗出物，心包粘连。
2.大肠杆菌性肉芽肿:病禽消瘦贫血、减食、拉稀，在肝、肠（十二指肠及盲肠）、肠系膜或心上有菜花状增生物，针头大至核桃大小，很容易与禽结核或肿瘤相混。
3.坠卵性腹膜炎及输卵管炎:输卵管扩张，内有干酪样团块及恶臭的渗出物。肠卡他性炎等病变。
4.
关节炎及滑膜炎:表现关节肿大，内含有纤维素或浑浊的关节液。
5.脑炎:表现昏睡、斜颈，歪头转圈，共济失调，抽搐，伸脖，张口呼吸，采食减少，拉稀，生长受阻，产卵显著下降。主要病变脑膜充血、出血、脑脊髓液增加。
6.肿头综合征:表现眼周围、头部、颌下、肉垂及颈部上2/3水肿，病鸡喷嚏，并发出咯咯声，剖检可见头部、眼部、下颌及颈部皮下黄色胶样渗出。
实验室检验：采用病原学检验方法，排除其他病原感染（病毒、细菌、支原体等），经鉴定为致病性血清型大肠杆菌，方可认为是原发性大肠杆菌病。
禽沙门氏菌病，由一种或多种血清型沙门氏菌所引起的一大群急性或慢性禽类疾病的统称。危害性大。主要包括3种：
1.鸡白痢
由鸡白痢沙门氏菌引起,最常见于鸡和火鸡。主要侵害雏鸡，呈急性败血症，大批死亡。幸存者多转成慢性或带菌者。对病程稍长者剖检可见心、肺出现坏死或结节，肝出血与坏死，胆囊肿大。母鸡感染后产蛋量、受精率与化率下降。剖检可见卵子变形、变色和变硬。公鸡则呈睾丸炎。
2.鸡伤寒
为鸡沙门氏菌所致的鸡与火鸡的败血症，其他禽类罕见。可经蛋传播。除雏鸡外亦常使青年或成年鸡群发生败血症而招致10～50％的死亡率。急性者无明显病变。亚急性或慢性者常见血液稀薄，肝肿呈青铜色，其表面与心肌有灰白色粟粒状坏死灶。偶有心包炎和卵黄性腹膜炎。卵子出血、变形、变色。雏鸡表现似鸡白痢。
3.禽副伤寒
由鼠伤寒等多种能运动的沙门氏菌引起的禽类疾病。可由污染的饲料感染，呈地方流行性。幼禽多呈急性和亚急性，成年或未成年禽则多为慢性或隐性感染。幼雏常因急性败血症而迅速死亡。成年患禽长期带菌与排菌。慢性的体瘦，肠道呈坏死性溃疡。雏鸡常出现颤抖、喘息和眼睑。病程稍长者可见卵黄凝固，肝、脾充血且有条纹状或针尖状出血与坏死灶。
实验室检验：根据流行特点、临床特征和病理变化只能怀疑为本病或作出初步诊断，确诊需采用病原学检查和血清学试验。
分离就是常规的涂平板 划线分离
大肠杆菌测定
伊红美蓝平板上典型大肠杆菌菌落接种到营养琼脂平板，在(36土1)℃培养18h -24 h 。每个平板至少挑选2个菌落。挑取上述菌落纯培养物接种3.6.3生化培养基和乳糖发酵管，(36士1)0C培养24h 后观察结果。
大肠杆菌与非大肠杆苗鉴别试验方法
靛基质试验:
滴加Kovacs氏靛基质试剂0.1 m L于靛基质试验培养基中混合，静置，观察结果。
出现红色环的为反应阳性;出现黄色环的为反应阴性。
甲基 红(MR)试验:
滴加甲基红指示剂0.2 m 1于MR-VP培养基中混合，观察结果。
出现红色为阳性反应;出现黄色为阴性反应。
维 培(VP)试验:
滴加VP试剂甲液0. 2 mL于MR-VP培养基中混匀，再滴加VP试剂乙液0.1mL混匀，静置，观察结果。在15min内出现红色的为阳性反应;无颜色变化的为阴性反应。阴性结果1h后再观察一次出现红 色也为阳性反应。
西蒙氏柠檬酸盐试验:观察培养基颜色变化，出现蓝色为阳性反应;不变色为阴性反应。
1、发酵法
这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养，该培养基含有荧光底物，需要培养 24 h。然后对荧光底物进行释放，需要采用葡萄糖醛酸进行，让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。
采用这样的方式方法，还可以进行统计学估计原来样品中的菌落。主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等 。
2、滤膜法
该方法主要过程：加入 10 mL 左右的无菌水于滤器中，然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁，再进行过滤，将滤膜放在 M-FC 培养基中，两者之间不能够有气泡，然后进行密封，存放温度为 44.5℃，存放时间约 24 h，直到大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。
然后记录数据，估算每一单位的水溶液菌群数量，然后进行大肠杆菌量值的换算 。
扩展资料：
大肠杆菌是短杆菌，两端呈钝圆形，革兰阴性。有时因环境不同，个别菌体出现近似球杆状或长丝状 ；大肠杆菌多是单一或两个存在，但不会排列呈长链形状。
大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构，但是不能形成芽孢；多数大肠杆菌菌株生长有菌毛，其中一些菌毛是针对宿主及其他的一些组织或细胞具有黏附作用的宿主特异性菌毛 。
生化特性
大肠杆菌在常用的生化特性检测项目中，甲基红试验呈阳性，吲哚产生和乳糖发酵是阳性（个别菌株表现阴性），维-培试验是阴性，尿素酶和柠檬酸盐利用呈阴性（极个别菌株表现阳性），硝酸盐还原试验表现阳性，氧化酶表现阴性，氧化-发酵试验表现为F型
参考资料来源：百度百科-大肠杆菌
大肠杆菌测定
伊红美蓝平板上典型大肠杆菌菌落接种到营养琼脂平板，在(36土1)℃培养18h -24 h 。每个平板至少挑选2个菌落。挑取上述菌落纯培养物接种3.6.3生化培养基和乳糖发酵管，(36士1)0C培养24h 后观察结果。
大肠杆菌与非大肠杆苗鉴别试验方法
靛基质试验:
滴加Kovacs氏靛基质试剂0.1 m L于靛基质试验培养基中混合，静置，观察结果。
出现红色环的为反应阳性;出现黄色环的为反应阴性。
甲基 红(MR)试验:
滴加甲基红指示剂0.2 m 1于MR-VP培养基中混合，观察结果。
出现红色为阳性反应;出现黄色为阴性反应。
维 培(VP)试验:
滴加VP试剂甲液0. 2 mL于MR-VP培养基中混匀，再滴加VP试剂乙液0.1mL混匀，静置，观察结果。在15min内出现红色的为阳性反应;无颜色变化的为阴性反应。阴性结果1h后再观察一次出现红 色也为阳性反应。
西蒙氏柠檬酸盐试验:观察培养基颜色变化，出现蓝色为阳性反应;不变色为阴性反应。
大肠杆菌鉴定结果
靛基质 MR VP 西蒙氏柠檬酸盐 鉴定
＋
－ ＋
＋ －
－ —
－ 典型大肠艾希氏杆菌
非典型大肠艾希氏杆菌
＋
－ ＋
＋ －
－ ＋
＋ 典型柠檬酸盐杆菌
非典型柠檬酸盐杆菌
－
＋ －
－ －
－ ＋
＋ 典型产气肠杆菌
非典型产气肠杆菌
如出现表1以外的生化反应类型，表明培养物可能不纯，应重新划线分离，必要时做重复试验。
结果报告
1M Vic 试 验结果为++一一、一+一一和乳糖发酵管产气者，查其EC肉汤产气管数及其稀释倍
数，对照附录B(资料性附录)中MPN检索表报告样品中大肠埃希氏杆菌MPN /a (mL)值
大肠杆菌测定
伊红美蓝平板上典型大肠杆菌菌落接种到营养琼脂平板，在(36土1)℃培养18h -24 h 。每个平板至少挑选2个菌落。挑取上述菌落纯培养物接种3.6.3生化培养基和乳糖发酵管，(36士1)0C培养24h 后观察结果。
大肠杆菌与非大肠杆苗鉴别试验方法
靛基质试验:
滴加Kovacs氏靛基质试剂0.1 m L于靛基质试验培养基中混合，静置，观察结果。
出现红色环的为反应阳性;出现黄色环的为反应阴性。
甲基 红(MR)试验:
滴加甲基红指示剂0.2 m 1于MR-VP培养基中混合，观察结果。
出现红色为阳性反应;出现黄色为阴性反应。
维 培(VP)试验:
滴加VP试剂甲液0. 2 mL于MR-VP培养基中混匀，再滴加VP试剂乙液0.1mL混匀，静置，观察结果。在15min内出现红色的为阳性反应;无颜色变化的为阴性反应。阴性结果1h后再观察一次出现红 色也为阳性反应。
西蒙氏柠檬酸盐试验:观察培养基颜色变化，出现蓝色为阳性反应;不变色为阴性反应。
大肠杆菌鉴定结果
靛基质 MR VP 西蒙氏柠檬酸盐 鉴定
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－ 典型大肠艾希氏杆菌
非典型大肠艾希氏杆菌
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＋ 典型柠檬酸盐杆菌
非典型柠檬酸盐杆菌
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＋ 典型产气肠杆菌
非典型产气肠杆菌
如出现表1以外的生化反应类型，表明培养物可能不纯，应重新划线分离，必要时做重复试验。
结果报告
1M Vic 试 验结果为++一一、一+一一和乳糖发酵管产气者，查其EC肉汤产气管数及其稀释倍
数，对照附录B(资料性附录)中MPN检索表报告样品中大肠埃希氏杆菌MPN /a (mL)值
答：1.大肠杆菌测定方法：用伊红美蓝平板上典型大肠杆菌菌落接种到营养琼脂平板，在36摄氏度培养18到24小时。2.每个平板至少挑选2个菌落。3.挑取上述菌落纯培养物接种363生化培养基和乳糖发酵管，36摄氏度培养24小时后观察结果。4.大肠杆菌和非大肠杆苗鉴别试验方法靛基质试验：滴加Kovacs氏靛基质试剂0.1毫升于...
答：用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌 步骤如下：①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大...
答：西蒙氏柠檬酸盐试验:观察培养基颜色变化，出现蓝色为阳性反应;不变色为阴性反应。大肠杆菌鉴定结果 靛基质 MR VP 西蒙氏柠檬酸盐 鉴定 ＋ － ＋ ＋ － － —－ 典型大肠艾希氏杆菌 非典型大肠艾希氏杆菌 ＋ － ＋ ＋ － － ＋ ＋ 典型柠檬酸盐杆菌 非典型柠檬酸盐杆菌 － ＋ － － － － ...
答：野生型大肠杆菌是指与常见菌株相比没有任何经过基因工程改变的变异，其结构、生物学特性与常见菌株相同。鉴别野生型大肠杆菌的方法可以通过观察细菌在营养平板中的生长速度、菌落颜色以及在含有不同抗生素的培养基上的生长状态来分辨。在营养平板上，野生型大肠杆菌通常会在18小时内在37℃的环境下生长，而如果...
答：1.向培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。2.鉴别培养基（麦康凯、SS、伊红美蓝）：一般无色菌落。为革兰氏阴性细菌。
答：2、分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。其他标本可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。37℃孵育18～24小时后，观察菌落并涂片染色镜检。采用一系列生化反应进行鉴定。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要时检定肠霉毒素。泌尿系统...
答：1)E M B平板上；具黑色口必有金属光泽或无金属光泽的菌落 2)革兰氏-染色；呈红色的阴性短杆菌 3)生化为应 4)传统的这种检测方法确定大肠杆菌需要5-7天的时间，且必须做生化鉴定才能确定，使用显色培养基24小时出结果，大肠杆菌显兰色，其他菌显无色，结果一目了然，大大缩短了检测时间，显色培养...
答：LB肉汤中，37℃培养16~18h。分离鉴定：然后用接种环挑取菌液划线于麦康凯琼脂或伊红美蓝琼脂上，培养16~18h后，挑取麦康凯琼脂上红色不透明中等大小可疑菌落或伊红美蓝琼脂上黑色带金属光泽的可疑菌落进行纯培养和鉴定。革兰氏染色镜检：挑取革兰氏染色呈红色短杆菌的菌落做进一步鉴定。生化鉴定：...
答：1、细菌分离鉴定法 分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液先经肉汤增菌，然后转种血琼脂平板。其他标本同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。37℃孵育18～24小时后，观察菌落涂片染色镜检。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要的时候检定肠霉毒素。2、卫生细菌学检查法 ...
答：大肠杆菌鉴别（鉴定）实验会用到伊红美蓝试剂。伊红美蓝培养基（eosin-methylene blue medium,简称EMB medium），一般用于检测大肠杆菌。 伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大...
