请教MIN6细胞培养方法
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-02
MIN6的培养基问题
原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存；
传代培养首先：
细胞复苏:
1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.
2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,完全培养基重悬培养,适时换液.
细胞传代:
1.贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,新鲜培养基重悬沉淀,加入完全培养基后继续培养或实验.
2.悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度或需更换新培养基,可先离心（1000rpm,5min左右）后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养.
具体更详细的你还是看看细胞培养的专业书吧!
原代细胞是如何培养的?选择组织块还是消化液培养法?
答：（6）打开搅拌器的电源开关，使搅拌子旋转， 关好培养箱，让胰蛋白酶进行消化。（7）在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。（8）先以100μm 不锈钢筛过滤，滤...
细胞培养应注意的无菌操作主要有哪些
答：1.打开无菌工作台及净化室的紫外灯，消毒半小时以上。2.进入净化室前先关闭紫外灯，打开超净台风机，等待30min以上，以排尽臭氧。3.穿好隔离衣，戴好口罩，帽子。4.风淋2分钟。5.0.1%过氧乙酸水泡手，擦干。6.点燃酒精灯；超净台内应避免放入过多的物品；使用的吸管，滴管，试管，培养瓶等均事...
细胞冻存的步骤
答：4. 消化： 北京协和医院中心实验室实验指南 拿出 5mL 移液管，插入电枪中，酒精灯过火灼烧，吸取 2mL 0.25%胰酶，混匀， 放于 37℃孵箱中消化 5-6min。 取下用后的移液管。5. 中和： 从孵箱中拿出培养瓶，显微镜下观察细胞是否被完全消化下来，5mL 灭菌后移液 管加入 3mL 培养液终止消化。
细胞培养污染如何防止?
答：在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。细胞培养注意事项 1、确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，...
传代细胞的培养步骤
答：（4）轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量之新鲜培养基，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。2、悬浮型细胞(suspensioncell)（1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000rpm5分钟。（2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后...
细胞悬浮培养技术
答：植物细胞悬浮培养 实验方法 1.用镊子夹取出生长旺盛的松软愈伤组织，放入三角瓶中并轻轻夹碎。每100ml三角瓶含灭过菌MS培养基10~15ml，每瓶接种1~1.5g愈伤组织，以保证最初培养物中有足够量的细胞。2.将已接种的三角置于旋转式摇床上。在100r/min，25~28℃条件下，进行振荡培养。3.经6~10天培养...
急求:做鼠细胞培养实验的具体步骤
答：2. 剪切：将心室肌用锋利的眼科剪反复剪切组织至剪成1～2mm3小块，在剪切过程中，可以适当向组织中滴加1～2滴培养液，以保持湿润。3. 消化：将组织小块转移至100ml的玻璃瓶中，再加入30～50倍组织量并预温37℃的0.08%胰酶消化液，37℃摇床消化6min左右。4. 细胞分离：消化完毕，用吸管轻轻...
用6孔板培养细胞后怎么做western blot,麻烦说明详细步骤,谢谢!_百度知...
答：去除培养基，加PBS清洗一或两遍，吸尽PBS尽量不留一滴，在冰上以每孔0.1ml加入裂解液，吹打使与细胞完全接触， 12000转/min，离心5分钟，取上清液。-20 ℃贮存。然后测浓度、上样。
肝癌细胞的培养
答：唐孟萱等采用下述方法进行细胞复苏:快速将所冻存细胞40℃水浴摇床60转/ min慢摇至其溶解,溶解后马上转入 37 ℃水浴箱,手工慢摇 恒温 2～3min复苏 ,复苏后 800 转/ min 离心 5min,吸去上清加入 10ml 含 15%胎牛 血清 DMEM 培养基 ,混匀后加入细胞培养板 ,每孔 1 ml,5%CO2温箱 37℃培养。唐孟萱等将上...
为什么检查细胞渗透性的试剂是一定浓度的
答：为什么检查细胞渗透性的试剂是一定浓度的 支原体检测试剂盒操作步骤：贴壁细胞：1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为1-2×104。同时，接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。2.5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min，3.吸去固定液，晾干。4.于每孔中，加入1...
看白介-1的文献时有见到过
高糖型DMEM培养基，15%胎牛血清(Gibco产)，5ul/L的β-巯基乙醇，双抗
比较难养
细胞培养首先分为原代培养和传代培养.
原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存；
传代培养首先：
细胞复苏:
应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.
2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,完全培养基重悬培养,适时换液.
细胞传代:
1.贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,新鲜培养基重悬沉淀,加入完全培养基后继续培养或实验.
2.悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度或需更换新培养基,可先离心（1000rpm,5min左右）后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养.
具体更详细的你还是看看细胞培养的专业书吧!
原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存；
传代培养首先：
细胞复苏:
1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.
2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,完全培养基重悬培养,适时换液.
细胞传代:
1.贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,新鲜培养基重悬沉淀,加入完全培养基后继续培养或实验.
2.悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度或需更换新培养基,可先离心（1000rpm,5min左右）后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养.
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答：（6）打开搅拌器的电源开关，使搅拌子旋转， 关好培养箱，让胰蛋白酶进行消化。（7）在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。（8）先以100μm 不锈钢筛过滤，滤...
答：1.打开无菌工作台及净化室的紫外灯，消毒半小时以上。2.进入净化室前先关闭紫外灯，打开超净台风机，等待30min以上，以排尽臭氧。3.穿好隔离衣，戴好口罩，帽子。4.风淋2分钟。5.0.1%过氧乙酸水泡手，擦干。6.点燃酒精灯；超净台内应避免放入过多的物品；使用的吸管，滴管，试管，培养瓶等均事...
答：4. 消化： 北京协和医院中心实验室实验指南 拿出 5mL 移液管，插入电枪中，酒精灯过火灼烧，吸取 2mL 0.25%胰酶，混匀， 放于 37℃孵箱中消化 5-6min。 取下用后的移液管。5. 中和： 从孵箱中拿出培养瓶，显微镜下观察细胞是否被完全消化下来，5mL 灭菌后移液 管加入 3mL 培养液终止消化。
答：在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。细胞培养注意事项 1、确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，...
答：（4）轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量之新鲜培养基，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。2、悬浮型细胞(suspensioncell)（1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000rpm5分钟。（2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后...
答：植物细胞悬浮培养 实验方法 1.用镊子夹取出生长旺盛的松软愈伤组织，放入三角瓶中并轻轻夹碎。每100ml三角瓶含灭过菌MS培养基10~15ml，每瓶接种1~1.5g愈伤组织，以保证最初培养物中有足够量的细胞。2.将已接种的三角置于旋转式摇床上。在100r/min，25~28℃条件下，进行振荡培养。3.经6~10天培养...
答：2. 剪切：将心室肌用锋利的眼科剪反复剪切组织至剪成1～2mm3小块，在剪切过程中，可以适当向组织中滴加1～2滴培养液，以保持湿润。3. 消化：将组织小块转移至100ml的玻璃瓶中，再加入30～50倍组织量并预温37℃的0.08%胰酶消化液，37℃摇床消化6min左右。4. 细胞分离：消化完毕，用吸管轻轻...
答：去除培养基，加PBS清洗一或两遍，吸尽PBS尽量不留一滴，在冰上以每孔0.1ml加入裂解液，吹打使与细胞完全接触， 12000转/min，离心5分钟，取上清液。-20 ℃贮存。然后测浓度、上样。
答：唐孟萱等采用下述方法进行细胞复苏:快速将所冻存细胞40℃水浴摇床60转/ min慢摇至其溶解,溶解后马上转入 37 ℃水浴箱,手工慢摇 恒温 2～3min复苏 ,复苏后 800 转/ min 离心 5min,吸去上清加入 10ml 含 15%胎牛 血清 DMEM 培养基 ,混匀后加入细胞培养板 ,每孔 1 ml,5%CO2温箱 37℃培养。唐孟萱等将上...
答：为什么检查细胞渗透性的试剂是一定浓度的 支原体检测试剂盒操作步骤：贴壁细胞：1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为1-2×104。同时，接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。2.5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min，3.吸去固定液，晾干。4.于每孔中，加入1...
