高中生物:单克隆抗体问题 请问为什么不是杂交瘤细胞就会死去,筛选原理是什么
第一次筛选：
（1）筛选对象：脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞（即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液）。另有少量多细胞聚体，因寿命短而迅速死亡，故无需特殊筛选。
（2）筛选方法：用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。（注重：HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路，而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。）
（3）筛选结果：脾-瘤细胞正常生长，其它细胞都会死亡。（析因：脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，虽有核酸合成的旁通路，但不能长期增殖；瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶，核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断，因核酸合成障碍而死亡；脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶，虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。）
第二次筛选：
（1）筛选对象：多克隆杂交瘤细胞群体。（即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。）
（2）筛选方法：抗体检测（ 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等，实际上是利用稀释法，在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养，然后检查每孔中产生特定抗体的能力）。
（3）筛选结果：产生专一性抗体的杂交瘤细胞。
1.
从经过特异性免疫的实验动物体内提取b细胞
2.
用动物细胞融合的方法将b细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞
3.
用特定的选择性培养基筛选出能够无限增殖并产生特异性抗体的杂交瘤细胞
4.
进行体内或体外培养。体内培养就是将杂交瘤细胞注入实验动物腹腔，将来从腹水中提取。体外培养，就是利用动物细胞培养的方法，将来从培养液中提取
单克隆抗体的优点是：特异性强、灵敏度高，并可大量制备
未融合细胞次黄嘌呤转移酶和胸腺苷酶活性正常，不能合成核酸。融合细胞可以通过旁路合成核酸，从而存活。
杂交瘤细胞具有双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体，又能无限增殖，所以不会死去。第一次筛选的原理是特定选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选的原理是专一抗体阳性检测筛选出能产生特定抗体的细胞群。
如果不是杂交瘤细胞，就不能无限增殖，不能无限增殖的细胞寿命都是有限的，细胞的衰老和死亡是细胞正常的生命特征。
单克隆抗体的制备过程有两次筛选，第一次筛选是为了获得杂交瘤细胞，可以根据细胞的形态、大小甚至染色体的数量来进行筛选，第二次筛选是为了获得能够制备抗体的杂交瘤细胞，可以用特定的培养基来进行筛选（选择培养基）。
因为杂交后有了可以不断增殖的基因，控制其不断地分裂。可以通过是否能表达出相应的抗体来进行筛选
高二生物上课：动物细胞工程之筛选杂交瘤细胞的原理和方法
