takara+dl2000

PCR扩增后的片段 用什么方法检测
答：聚合酶链式扩增反应。通过电泳进行产物定量只是相对的大概估算，一般的marker都有这样的功能，比如你的产物小于2000bp的话，你在泳道加入5ul 的TAKARA的DL2000marker，其中最亮的一条带750bp含量约为150ng，其他的条带约为50ng，根据你的条带的明暗和marker进行比较，即可粗略的估算你的产物的量。

怎么看dna MAKER 图
答：请问您是用那种maker? 根据片段不同主要有 2K（小片段） 15K（大片段） 还有更高的作为总DNA的maker。根据不同的marker找到对应的对照图。大片段跑得比小片段要快，所以从上到下是大片段到小片段分布。

网友看法：

衡蓓18740033128： 做PCR扩增产物是270bp,用什么样的Marker? -
惠安县温贞：: 用100bp ladder. ————————————————————————————————100bp ladder和100bp marker实际上性质相同,都指最小片段是100bp,以100bp递增的DNA marker.不同公司的marker片段数量略有不同.DL2000是DNAmarker,所有DNA marker的单位都是bp.蛋白质marker的单位才是道尔顿.明白没?_____________________________________________________ 没问题

衡蓓18740033128： 双酶切的20μL反应体系和反应时间如何确定?最好是说明原理.所用的酶都是Takara公司的 -
惠安县温贞：: 模板DNA 几百ng-几ug,区别不大 酶1 0.5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以.有个别酶需要55度. 注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性.反应体系中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中.

衡蓓18740033128： 双酶切连接转化反应谁了解
惠安县温贞：: 1、回收PCR产物:在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用...

衡蓓18740033128： ...我虽然知道摩尔质量比为3:1,但是如何具体计算,我用的载体是pUC18 - T,目的基因为1000bp,目的基因上样量为10ul,亮度与DL2000的1000bp的条带... - 作业帮
惠安县温贞：:[答案] 先算出你的载体和目的基因的浓度,(可以跟mark的亮度对比估算,也能用软件计算),再根据摩尔质量比和基因的大小算出质量比,再算出体积比就行